Summary

만성 요통의 기계론적 조사를 위한 쥐의 등 기계적 민감도 평가

Published: August 30, 2022
doi:

Summary

요통의 예방 및 관리를 위한 새로운 치료적 개입을 개발하기 위해 동물 모델은 번역 관점에서 이러한 치료법의 메커니즘과 효과를 조사해야 합니다. 현재 프로토콜은 쥐의 기계적 민감도를 평가하기 위한 표준화된 방법인 BMS 테스트를 설명합니다.

Abstract

요통은 전 세계적으로 장애의 주요 원인이며 극적인 개인적, 경제적, 사회적 결과를 초래합니다. 새로운 치료법을 개발하기 위해서는 번역 관점에서 새로운 치료법의 메커니즘과 효과를 조사하기 위한 동물 모델이 필요합니다. 허리 통증의 여러 설치류 모델이 현재 조사에 사용됩니다. 그러나 놀랍게도 요통 모델에서 기계적 민감도를 평가하기 위한 표준화된 행동 테스트는 검증되지 않았습니다. 이는 요통이 추정되는 동물이 통각 수용 자극에 국소 과민증을 나타내는지 확인하고 요통을 완화하기 위해 고안된 중재 중 민감도를 모니터링하는 데 중요합니다. 이 연구의 목적은 쥐 등의 기계적 민감도를 평가하기 위한 간단하고 접근 가능한 테스트를 마련하는 것입니다. 이 방법을 위해 특별히 테스트 케이지를 제작했습니다. 세로 x 너비 x 높이: 50 x 20 x 7cm, 상단에 스테인레스 스틸 메쉬가 있습니다. 이 테스트 케이지를 사용하면 등에 기계적 자극을 가할 수 있습니다. 테스트를 수행하기 위해 관심 영역에서 동물의 등을 면도하고 필요에 따라 다른 날에 테스트를 반복하도록 테스트 영역을 표시합니다. 기계적 역치는 앞에서 설명한 상하 방법을 사용하여 척수주위 근육에 적용된 Von Frey 필라멘트로 결정됩니다. 긍정적인 반응에는 (1) 근육 경련, (2) 아치형(등 신전), (3) 목 회전, (4) 등을 긁거나 핥기, (5) 탈출이 포함됩니다. 이 행동 테스트(BMS(Back Mechanical Sensitivity) 테스트)는 요통의 예방 및 관리를 위한 치료적 개입 개발을 위한 요통의 설치류 모델을 사용한 기계론적 연구에 유용합니다.

Introduction

요통(low back pain, LBP)은 전 세계적으로 장애의 주요 원인이며, 이는 개인적, 경제적, 사회적으로 극적인 결과를 초래한다 1,2,3,4. 매년 인구의 약 37%가 요통의 영향을 받습니다5. 요통은 보통 몇 주 이내에 해결되지만 개인의 24%-33%에서 재발하고 사례의 5%-10%에서 만성화된다2. 요통의 메커니즘과 영향 및 다양한 치료적 중재의 효과를 이해하기 위해 요통의 여러 동물 모델을 사용하여 요통의 임상 상태 또는 요통의 일부 구성 요소를 모방했습니다6. 이들 마우스 및 래트 모델은 다음 범주 중 하나 이상으로 분류될 수 있다: (1) 추간판 요통 7,8,, (2) 신경근성 요통 8,9,10,11, (3) 후관절 골관절염 12, 및 (4) 근육-유도성 요통 13,14 . 인간이 아닌 종에서는 통증을 직접 측정할 수 없기 때문에, 이러한 모델에서 통증과 유사한 행동을 정량화하기 위한 수많은 실험이 개발되었다8. 이 테스트는 유해한 자극 (기계적 힘 15,16,17, 열 자극18,19,20,21,22,23,24,25)에 의해 유발되거나 자발적으로 생성 된 행동 26,27,28,29를 평가합니다.

기계적 자극을 사용하는 방법에는 Von Frey 테스트 15,16 및 Randall-Selitto 테스트17이 포함됩니다. 열 자극을 사용하는 방법에는 테일 플릭 테스트(18), 핫 플레이트 테스트(19), 하그리브스 테스트(20) 및 열 프로브 테스트(21)가 있습니다. 저온 자극을 사용하는 방법에는 냉판 시험(cold plate test)22, 아세톤 증발 시험(acetone evaporation test) 23 및 저온 발바닥 분석(cold plantar assay)24가 포함된다. 자발적인 행동을 위한 방법으로는 찡그린 얼굴 척도(grimace scales)26, 굴을 파는 방법(burrowing)27, 체중부하 및 보행 분석(weight-bearing and a-pathit analysis)28, 자동화된 행동 분석(automated behavioral analysis)29 등이 있다. 이러한 수많은 테스트에도 불구하고 그 중 어느 것도 허리 통증 모델을 위해 특별히 설계되지 않았습니다.

이 연구의 목적은 쥐 등의 기계적 민감도를 평가하기 위한 간단하고 접근 가능한 테스트를 마련하는 것입니다. 이 기술은 주로 뒷발15,16의 발바닥 표면에 적용된 Von Frey 테스트를 기반으로합니다. Von Frey 테스트의 기본 원리는 관심 영역에 일련의 모노필라멘트를 사용하여 미리 결정된 일정한 힘을 전달하는 것입니다. 쥐가 통각 행동을 보이는 경우 반응은 양성으로 간주됩니다. 그런 다음 반응을 유발한 필라멘트를 기반으로 기계적 임계값을 계산할 수 있습니다. 본 연구에서는 쥐 등의 기계적 민감도를 결정하기 위해 Von Frey 테스트에서 채택한 간단하고 접근 가능한 방법이 제공됩니다.

Protocol

실험 프로토콜은 Université du Québec à Trois-Rivières의 동물 관리위원회의 승인을 받았으며 캐나다 동물 관리위원회의 지침과 국제 통증 연구 협회 (IASP)의 연구 및 윤리 문제위원회의 지침을 준수했습니다. 본 연구에서는 6마리의 수컷 Wistar 쥐(체중: 320-450g, 연령: 18-22주)를 사용했습니다. 동물들은 상업적 공급원으로부터 입수하였다 ( 재료의 표 참조). 이 쥐의 데이터는 이전 연구<sup class…

Representative Results

이 방법은 CFA와 대조군 쥐 사이의 기계적 민감도를 비교하기 위해 전체 데이터와 통계가 제시된 이전 연구에서 사용되었습니다30. 이전 연구에 포함된 6마리의 래트로부터의 대표적인 개별 데이터(좌측 및 우측 역치의 평균)가 도 3 및 표 1에 제시되어 있다. 기준선에서 기계적 민감도는 그룹 간에 유사했습니다. 요추 근육에 CFA를 근육 주사하면…

Discussion

중요 단계
BMS 테스트는 변화가 발생할 것으로 예상되는 시점 (통증 모델) 또는 약리학 적 또는 비 약리학 적 개입 후에 한 시점 또는 며칠 또는 몇 주에 걸쳐 반복적으로 쥐의 등에서 기계적 민감도를 평가하는 간단한 방법입니다. 이 방법의 중요한 문제에는 테스트 케이지가 포함되며, 그 치수는 쥐가 편안하지만 너무 많이 움직이지 않도록 보장해야 합니다. 동물의 등은 재현 가능?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 연구는 Fondation Chiropratique du Québec과 캐나다 자연 과학 및 공학 연구 위원회(MP: 보조금 #06659)의 보조금으로 지원되었습니다. 홍콩의 기여는 Université du Québec à Trois-Rivières (PAIR 프로그램)의 지원을 받았습니다. BP의 기여는 Fonds de recherche du Québec en Santé (FRQS)와 Fondation Chiropratique du Québec의 지원을 받았습니다. TP의 기여는 캐나다 자연 과학 및 공학 연구 위원회(Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada)의 지원을 받았습니다. NE와 EK의 기여는 Fondation Chiropratique du Québec의 지원을 받았습니다. MP의 기여는 FRQS에 의해 지원되었습니다.

Materials

Aerrane (isoflurane, USP) – Veterinary Use Only Baxter NDC 10019-773-60 Inhalation Anaesthetic ; DIN 02225875, for inducing anasthesia
Complete Freund Adjuvant (CFA) Fisher Scientific #77140 Water-in-oil emulsion of Complete Freund Adjuvant (CFA) with killed cells of Mycobacterium butyricum.
Male Wistar Rats Charles River Laboratories body weight: 320–450 g; age: 18-22 weeks.
Penlon Sigma Delta Vaporizer Penlon 990-VI5K-SVEEK Penlon Sigma Delta Vaporizer used for anasthesia
Sharpie Permanent Marker Sharpie BC23636 Permanent Marker, Fine Point, Black
Test cage Custom-made Width: 20 cm;  Length: 50 cm; Height from the bottom to the top: 40 cm; Height from the bottom mesh to the top of the cage: 7 cm; Wall thickness: 5 mm; Mesh: 1 mm wire with an 8 mm inter-wire distance   
Von Frey Filaments Aesthesio, Precise Tactile Sensory Evaluator 514000-20C Filaments from 0.07 g to 26 g
Wahl Professional Animal, ARCO Cordless Pet Clipper, Trimmer Grooming  Wahl Kit #8786-1201 Animal hair trimmer, for shaving purposes, zero blade 

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Cite This Article
Khosravi, H., Eskandari, N., Provencher, B., Paquette, T., Leblond, H., Khalilzadeh, E., Piché, M. Back Mechanical Sensitivity Assessment in the Rat for Mechanistic Investigation of Chronic Back Pain. J. Vis. Exp. (186), e63667, doi:10.3791/63667 (2022).

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