本研究中描述的利用肠道同质化提取物和免疫荧光染色的外体检测是一种研究胃肠道中念珠菌的催眠形态的新方法。 该方法可用于研究调节肠道形态遗传过渡的环境信号。
胃肠道(GI) 的白种病膜形成受到各种环境信号的严格控制,在这种机会性真菌病原体的传播和发病机制中起着重要作用。然而,在体内的GI道道中可视化真菌催眠的方法具有挑战性,这限制了对控制这种形态过程的环境信号的理解。此处描述的协议演示了一种新颖的外生体方法,用于在肠道同质性提取物中可视化催眠形态。使用体外测定,这项研究证明,来自抗生素治疗小鼠的切克萨尔含量,但不是来自未经治疗的对照小鼠,促进肠道内 C.albicans 催眠膜形成。此外,从抗生素治疗的小鼠中加入特定组肠道代谢物,可不同地调节生外膜形成。综合起来,该协议代表了一种识别和研究控制胃肠道中 C.albicans 催眠形态形成的环境信号的新方法。
念珠菌是一种机会主义的多态性真菌病原体,通常是共生性的,但可以经历形态变化,形成一种致命的形式,能够引起免疫功能低下的个体1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13等危及生命的感染。C. albicans是全身性耳部感染的主要原因,即使抗真菌治疗 2、14、15,死亡率也是40~u201260%。虽然C.albicans居住在不同的宿主利基,包括女性生殖系统16,17,口腔健康个体18和胃肠道(GI)19,20,大多数全身感染来自胃肠道,此外, 全身感染的来源通常被证实为胃肠道21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34。GI道区中的二比二丹致病性受多种因素的影响;然而,毒性所需的一个主要特征是,从酵母细胞形态过渡到毒性催眠细胞形态35,36,37,38,39,40,41,42,43,44。感染期间从胃肠道附着和传播的C.albicans与它从共生酵母转化为毒催眠剂的能力高度相关,使真菌能够引起侵入性疾病44,45,46,47,48,49,50,51,52,53。
肠道中的各种因素,包括n-乙酰葡萄糖胺,调节由C.albicans形成催眠。因此,缩小有关这种真菌病原体在胃肠道54、55、56中催眠形态的知识差距至关重要。最近的证据表明,各种肠道代谢物在体外57、58、59、60中对C.albicans的催眠形态进行差分控制。然而,技术约束在尝试研究体内肠道样本中的C.albicans催眠形成时存在问题,特别是染色酵母和催眠细胞以及催眠细胞的定量分析。为了了解胃肠道中C.albicans催眠病的形态,利用小鼠同质化肠道含量的可溶性提取物,开发出一种外生殖方法,以研究代谢物对真菌催眠形态生成的影响。利用来自具有抗药性且易感染C.albicans GI感染的小鼠的肠道样本,此方法将有助于识别和研究代谢物、抗生素和异体生物对胃肠道真菌性脂肪形态生成的影响。
本文描述的方法提出了一种新方法,用于研究抗生素、饮食、异种生物和治疗对胃肠道中C.albicans催眠膜形成的影响。由于大部分全身感染来自胃肠道21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34,<sup c…
The authors have nothing to disclose.
作者承认中西部大学细胞和分子核心研究机构的资源和支持。
1 – 10 µL Pipet Tips | Fisher Scientific | 02-707-454 | Misc |
100 – 1000 µL Pipet Tips | Fisher Scientific | 02-707-400 | Misc |
20 – 200 µL Pipet Tips | Fisher Scientific | 02-707-451 | Misc |
2-methylbutyric acid | Sigma | 193070-25G | hyphal-inhibitory compound |
488 goat anti-rabbit IgG | Invitrogen (Fisher) | A11008 | IF Staining secondary ab |
Agar | Fisher | BP1423-500 | YPD agar component |
Automated Imaging Microscope | Keyence | BZX700 | |
Candida Albicans Antibody | Invitrogen (Fisher) | PA1-27158 | IF Staining primary ab |
cefoperazone | Cayman | 16113 | antibiotic |
deoxycholic acid | Sigma | 30960 | hyphal-inhibitory compound |
D-Glucose | Fisher | D16-500 | hyphal-promoting compound |
forceps | Fisher | 08-885 | |
lactic acid | Alfa Aesar | AAAL13242-06 | hyphal-inhibitory compound |
lithocholic acid | Sigma | L6250-10G | hyphal-inhibitory compound |
palmitic acid | Sigma | P5585-10G | hyphal-inhibitory compound |
Paraformaldehyde | Alfa Aesar | A11313 | IF Staining fixative |
Phosphate-buffered saline (PBS), 10x | Alfa Aesar | J62692 | PBS component |
p-tolylacetic acid | SCBT | sc-257959 | hyphal-inhibitory compound |
sebacic acid | Sigma | 283258-250G | hyphal-inhibitory compound |
sharp ended scissors | Fisher | 28301 | |
sterile Milli-Q water | N/A | N/A | Misc |
YPD Broth | BD Biosciences | 242810 | YPD agar component |