Здесь мы представляем протокол временно улучшить функции сердца в мышах мышечная дистрофия Дюшенна, трансплантация exosomes, производные от нормальных миогенных прародитель клеток.
Мышечная дистрофия Дюшена (МДД) является Х-сцепленный рецессивный генетическое заболевание вызвано отсутствием функциональной делеций белка. Болезнь нельзя вылечить, а как болезнь прогрессирует, пациент развивает симптомы Дилатационная кардиомиопатия, аритмии и застойной сердечной недостаточности. ДМДMDX мутантных мышей не выражают делеций и широко используются как мыши модель DMD. В нашем недавнем исследовании, мы наблюдали что intramyocardial инъекции широкий типа (WT)-миогенных прогениторных клеток, полученных exosomes (MPC-Exo) временно восстановлен выражение делеций в миокарде DMDMDX мутантных мышей, который был связан с временным улучшением функции сердца, предполагая, что WT-MPC-Exo может предоставить возможность для облегчения сердечных симптомов DMD. Эта статья описывает технику MPC-Exo очищения и трансплантации в сердцах DMDMDX мутантных мышей.
Мышечной дистрофии Дюшенна (ДМД) является Х-хромосомой рецессивных, прогрессивный нервно-мышечные заболевания вызванные мутация в гене DMD и потере функциональных делеций1. Делеций выражается главным образом в скелетных мышцах и миокарда и менее выражена в гладкие мышцы, железы внутренней секреции и нейроны2,3. DMD-это наиболее распространенный тип мышечной дистрофии с заболеваемостью одному 3500 до 5000 новорожденных мальчиков во всем мире4,5. Люди обычно развиваются прогрессивная мышечная некроза, потеря независимых мимо раннего подросткового возраста и смерть в второй-третьей декадах их жизни из-за сердечной и дыхательной недостаточности6.
Расширенная кардиомиопатия, аритмии и застойной сердечной недостаточности являются проявлением DMD7,8общих сердечно-сосудистой системы. Болезнь нельзя вылечить, поддерживающее лечение может улучшить симптомы или задержать прогрессирование сердечной недостаточности, но это очень трудно улучшить сердце функции9,10.
Похож на ДМД пациентов, Х-хромосомой мышечная дистрофия (MDX) мышах дефицит белка делеций и настоящем симптомы кардиомиопатия11и поэтому широко используются в ДМД связанные кардиомиопатия исследований. Чтобы восстановить делеций в пораженных мышц, аллогенных стволовых клеток оказалось эффективным средством лечения для ДМД12,,1314. Exosomes, 30-150 Нм мембрана везикулы выделяемый различных типов клеток, играют ключевую роль в области коммуникации к ячейке посредством генетического материала транспорта, таких как матричная РНК (мРНК) и некодирующих RNAs15,16,17 ,18,19,,2021.
Наши предыдущие исследования показали, что exosomes, производные от миогенных прогениторных клеток (ПДК), например C2C12 клеточной линии, могут передавать делеций мРНК в принимающей кардиомиоцитов после прямого впрыска сердца22, указывающее что аллогенной доставки MPC-производные exosomes (MPC-Exo) может временно восстановить DMD экспрессии генов мышей многомерных выражений. Эта статья посвящена методам очистки и трансплантации MPC-Экзо.
Метод изоляции чисто exosomes имеет важное значение для изучения функции exosomes. Один из распространенных методов для exosome изоляции является полиэтиленгликолей (шпеньки) при посредничестве осадков17,18,25. Exosomes может быть химически осажденный …
The authors have nothing to disclose.
Тан были частично поддержаны американской ассоциации сердца: GRNT31430008, низ-AR070029, низ-HL086555, низ-HL134354.
0.22-μm Filter | Fisherbrand | 09-720-004 | |
15-cm Cell Culture Dish | Thermo Fisher Scientific | 157150 | |
24-gauge catheter | TERUMO | SR-OX2419CA | |
31-gauge insulin needle | BD | 328291 | |
4% paraformaldehyde | Affymetrix | AAJ19943K2 | |
50 mL Centrifuge Tubes | Thermo Fisher Scientific | 339652 | |
6-0 suture | Pro Advantage by NDC | P420697 | |
Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit IgG | Thermo Fisher Scientific | A-11008 | |
Antibiotic Antimycotic Solution | Corning | 30-004-CI | |
Anti-Dystrophin antibody | Abcam | ab15277 | |
Antigen retriever | Aptum Biologics | R2100-US | Antigen recovery |
Autofluorescence Quenching Kit | Vector Laboratories | SP-8400 | |
C2C12 cell line | ATCC | CRL-1772 | |
Centrifuge | Unico | C8606 | |
Change-A-Tip High Temp Cauteries | Bovie Medical Corporation | HIT | |
Confocal microscopy | Zeiss | Zeiss 780 Upright Confocal | |
DBA/2J-mdx mice | The Jackson Laboratory | 013141 | |
DMEM | Corning | 10-013-CM | |
Fetal Bovine Serum (FBS) | Corning | 35-011-CV | |
Goat serum | MP Biomedicals, LLC | 191356 | |
Isoflurane | Patterson Veterinary | 07-893-1389 | |
Ketamine | Henry Schein | 056344 | |
Mounting Medium with DAPI | Vector Laboratories | H-1500 | |
Mouse Retractor Set | Kent Scientific | SURGI-5001 | |
Polyethylene glycol tert-octylphenyl ether | Fisher Scientific | BP151-100 | |
Rodent ventilator | Harvard Apparatus | 55-7066 | |
SW-28 Ti rotor | Beckman | 342207 | |
The Vevo 2100 Imaging Platform | FUJIFILM VisualSonics | Vevo 2100 | Ultrasound System |
Ultracentrifuge | Beckman | 365672 | |
Ultra-Clear Tubes | Beckman | 344058 | |
Xylazine (XylaMed) | Bimeda-MTC Animal Health Inc. | 1XYL003 8XYL006 |