Low-cost protocole d’analyse de l’empreinte et la pendaison de zone Test pour souris appliqué le Stress chronique retenue
Summary
Le protocole de bas prix consistant en analyse de l’empreinte et la pendaison boîte test après que retenue pour le stress est utile pour évaluer les troubles du mouvement du modèle murin.
Abstract
Trouble de la démarche est fréquemment observée chez les patients atteints de troubles de la motricité. Dans les modèles de souris utilisées pour les troubles du mouvement, analyse de la démarche est un test comportemental important pour déterminer si les souris imitent les symptômes des patients. Déficits moteurs sont souvent induites par le stress, quand aucun phénotype moteur spontanée n’est observée dans les modèles murins. Par conséquent, analyse de démarche suivie par le stress de chargement serait une méthode sensible pour évaluer le phénotype moteur dans des modèles murins. Toutefois, les chercheurs font face à l’exigence d’un appareil coûteux pour obtenir automatiquement les résultats quantitatifs de l’analyse de la démarche. Pour le stress, stress par des méthodes simples de chargement sans appareils coûteux requis pour un choc électrique et forcé en cours d’exécution est souhaitable. Par conséquent, nous introduisons un protocole simple et peu coûteux consistant en analyse d’empreinte avec du papier et d’encre, pendaison boîte test pour évaluer la fonction motrice, et chargement de stress défini par retenue avec un tube conique. Les déficits moteurs de souris ont été détectés avec succès par le présent protocole.
Introduction
Troubles de la motricité sont définies comme les perturbations du système nerveux montrant un excès ou un manque de mouvements volontaires ou automatique1. En particulier, trouble de la démarche est souvent documenté chez les patients atteints de troubles de circulation pour2,3,4. Analyse de la démarche est donc un test comportemental adapté pour la validation des modèles animaux de dyskinésies. Chez les souris, les allures automatisé analyses ont été réalisées pour la marche à vitesse naturelle5 et à une vitesse réglable par tapis roulant6,7. Ces analyses fournissent automatiquement les résultats quantitatifs de la démarche. Une autre méthode pour détecter le trouble de la démarche est appelée analyse de l’empreinte. Après marquage le fond des pieds avec de l’encre, souris marchent sur papier, et les empreintes sont analysés. Au départ, Vaseline et en poudre de charbon de bois ont été utilisées pour visualiser l’ empreinte8et puis ont été remplacés par l’encre le polygraphe papier9 et révélateurs photographiques sur papier photographique10. Une méthode moins coûteuse et moins toxique à l’aide d’encre et papier que les autres méthodes reste à ce jour11. Analyse de l’empreinte est moins cher par rapport à l’analyse automatisée5,6,7 et serait utile pour évaluer les troubles du mouvement chez les modèles murins pour les chercheurs sans fonds de recherche abondante .
La pendaison épreuve de boîte est une sorte de quatre tests de pendaison de branche à l’aide de fil cage couvercle12 et wire mesh écran13. La boîte est un appareil avec couvercle pivotant treillis sur le dessus de la boîte le long d’une barre centrale. En plus de l’analyse de la démarche, le test est peu coûteuse et facilement possible. Par conséquent, nous avons effectué la pendaison boîte test pour évaluer la force de préhension et l’équilibre, de plus à l’analyse d’empreinte de pas dans le présent protocole.
Stress induit des symptômes de troubles de circulation14,15. Déficits moteurs sont souvent induites par plusieurs stress chroniques, même quand aucun phénotype moteur spontanée n’est observée dans les modèles murins d’un mouvement trouble16,17,18. Retenue est l’une des méthodes couramment utilisées pour le chargement chez la souris, parce que l’animal n’est pas physiquement endommagé19 et le coût est inférieur comparé avec d’autres méthodes telles que l’électrocution avec des appareils dédiés de stress et forcé en cours d’exécution avec l’utilisation d’un tapis roulant. Retenue par un tube, qui est effectué par une souris dans un tube conique troués 50 mL de confinement, est plus facile que d’autres méthodes telles que fil mesh passoire, branche enregistrée et habillage d’animaux avec de la gaze (révisé20). Dans cet article, nous résumons les protocoles de l’empreinte de l’analyse et la boîte de la pendaison d’essai après retenue par un tube. Ce protocole permettrait d’utiliser des modèles de souris de dyskinésies sans phénotype moteur spontané.
Protocol
Representative Results
Discussion
L’analyse de l’empreinte et la boîte de pendaison d’essai sont simples et peu coûteux des tests comportementaux pour la fonction motrice des souris. Les phénotypes neurocomportementales dans plusieurs modèles de souris ont été correctement détectés par ces tests. Par exemple, raccourcir la longueur de foulée dans la sclérose latérale amyotrophique24, augmentation de la longueur de foulée asymétrique à l’ataxie-télangiectasie25, accroissement de la dur…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par KAKENHI JSPS (société japonaise pour la Promotion des sciences) (subvention pour la recherche scientifique C), accorder le numéro 18K 07373 (H.S.) et des subventions pour les universités privées.
Materials
| Hanging box | O’hara & Co. | http://ohara-time.co.jp/products/wire-hanging-test/ | |
| Marking pen | ZEBRA | MO-120-MC-BK | |
| Goal box | O’hara & Co. | http://ohara-time.co.jp/products/balanced-beam-test/ | Accessory for apparatus of balanced beam test |
| Boxes | O’hara & Co. | – | Side wall of runway |
| Black ink | Shin-asahi | – | |
| Red ink | Maruyamakogyo | BC-6 | |
| Disposable Petri Dish | Corning | 351008 | Petri dishe (35 mm in diameter) |
| Askul Multipaper Super White J Monochrome A3 | Askul | 701-712 | White paper (29.7 cm x 42 cm x 0.09mm) |
| 50 mL Conical tube | Corning | 430829 | |
| Square drill | KAKURI Corporation | DIY FACTORY (K32-0313) |
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