Summary

Um protocolo otimizado de Rhizobox para visualizar o crescimento da raiz e receptividade aos nutrientes localizadas

Published: October 22, 2018
doi:

Summary

Visualizar e medir raiz crescimento em situ são extremamente desafiador. Apresentamos um método rhizobox personalizável para controlar o desenvolvimento radicular e proliferação ao longo do tempo em resposta ao enriquecimento de nutrientes. Este método é usado para analisar diferenças genotípicas milho na plasticidade da raiz em resposta a uma fonte de nitrogênio orgânico.

Abstract

As raízes são notoriamente difíceis de estudar. O solo é tanto uma barreira visual e mecânica, tornando difícil rastrear raízes em situ sem colheita destrutiva ou equipamento caro. Apresentamos um método de rhizobox acessível e personalizável que permite a visualização não-destrutiva de crescimento das raízes ao longo do tempo e é particularmente bem adaptado para estudar a plasticidade da raiz em resposta a patches de recurso localizado. O método foi validado pela avaliação milho variação genotípica em respostas de plasticidade para patches contendo resíduo vegetal N-rotulado de 15. Métodos são descritos para obter medições do desenvolvimento representante ao longo do tempo, medir a densidade de comprimento raiz em patches contendo recursos e controle, calcular taxas de crescimento de raiz e determinar recuperação 15N pela planta raízes e brotos. Vantagens, limitações e potenciais aplicações futuras do método também são discutidas. Embora deve ter cuidado para garantir que as condições experimentais não viés dados de crescimento de raiz, o protocolo de rhizobox apresentado aqui produz resultados confiáveis se realizado com suficiente atenção aos detalhes.

Introduction

Embora muitas vezes negligenciado em comparação com suas contrapartes na superfície, as raízes desempenham um papel fundamental na aquisição de nutrientes de planta. Dado o custo do carbono substancial de manutenção e construção de raiz, as plantas desenvolveram mecanismos para desenvolver raízes somente onde forrageamento vale a pena o investimento. Sistemas da raiz pode, portanto, eficientemente e dinamicamente a mina patches de recurso por proliferando em hotspots, estrogenos taxas de absorção e rapidamente se nutrientes para o floema por mais transporte1. Respostas de plasticidade podem variar amplamente entre planta espécies ou genótipos2,3 e dependendo da forma química do nutriente envolvido4,5. Variação na plasticidade de raiz deve ser explorada ainda mais, como compreensão respostas raiz complexa de recursos heterogêneos solo poderiam informar reprodução e estratégias de gestão para aumentar a eficiência de utilização de nutrientes na agricultura.

Apesar de sua necessidade e relevância para os sistemas de planta de entendimento, Visualizar e quantificar a plasticidade de raiz em escalas relevantes coloca desafios técnicos. Escavando a coroa da raiz do solo (6de “shovelomics”) é um método comum, mas raizes finas exploram pequenos poros entre agregados de solo, e escavação, inevitavelmente, leva a algum grau de perda dessas raízes frágeis. Além disso, colheita destrutiva torna impossível acompanhar as mudanças em um sistema de raiz ao longo do tempo. In situ métodos de imagem como tomografia computadorizada de radiografia computadorizada permitem a visualização directa dos recursos de solo e raízes em alta resolução espacial7, mas são caros e requerem o equipamento especializado. Hidropônicas experiências evitar restrições associadas com a extração de raízes do solo, mas arquitetura e morfologia da raiz diferem em meios aquosos em comparação com as restrições mecânicas e complexidade biofísica dos solos8,9. Finalmente, funções e processos de rizosfera não podem ser integradas com plasticidade do desenvolvimento nestes meios artificiais.

Apresentamos um protocolo para a construção e uso de rhizoboxes (recipientes retangulares estreitas, clear-face) como um método de baixo custo, personalizável para caracterizar o crescimento da raiz no solo ao longo do tempo. Quadros especialmente projetados incentivam as raizes cresçam preferencialmente contra o painel traseiro devido ao geotropismo, aumentando a precisão das medições de comprimento de raiz. Rhizoboxes são comumente usados para estudar o crescimento das raízes e rizosfera interações10,11,12, mas o método apresentado aqui oferece uma vantagem na simplicidade, com seu design único compartimento e barato materiais e é projetado para estudar respostas de raiz para nutrientes localizadas. No entanto, o método também pode ser adaptado para estudar uma gama de outros processos de raiz e rizosfera como concorrência intra/interspecies, distribuição espacial de compostos químicos, micróbios ou atividade enzimática. Aqui, vamos investigar diferenças genotípicas entre híbridos de milho em resposta a patches de 15N-rotulado vegetal resíduo e destaque resultados representativos para validar o método de rhizobox.

Protocol

1. preparação da frente e traseiros painéis e espaçadores Prepare os painéis dianteiros e traseiros. Cortados dois pedaços de acrílico grosso de clara 0,635 cm a 40,5 cm de largura por 61 cm longo por caixa ou comprar peças pré-cortadas (ver Tabela de materiais). Usando uma broca projetada para acrílico, furos 0,635 cm de diâmetro de 1,3 cm entre as bordas de lado no 2.5, 19, 38 e 53,3 cm do topo. Furos de 1,3 cm da borda inferior a 2,5 e 20,3 cm 38 do lado esquerd…

Representative Results

As raízes cresceram preferencialmente contra a parte de trás da caixa, como previsto. Comprimento total rastreados raiz na parte de trás da caixa variou entre 400 e 1.956 cm, em comparação com 758-93 cm na frente da caixa. Coeficientes de correlação de Pearson emparelhados foram calculados entre tamanho de raiz digitalizada e rastreados raiz na frente da caixa, parte traseira da caixa, e a soma de frente e de trás foi usada para determinar se o rastreamento com precisão refletido…

Discussion

O rhizoboxes descrito neste protocolo pode ser usado para responder a perguntas variadas em raízes e rizosfera de ciência e ter encontrado diversas noutro local usa10,20,21,22,23 , 24 , 25. outros pesquisadores capturaram imagens do tempo-lapso de rhizoboxes21,…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Os autores gostaria de reconhecer os revisores anônimos para seus comentários, bem como J.C. Cahill e Tan Bao para orientação inicial no desenvolvimento do protocolo rhizobox. O financiamento foi fornecido pela Fundação para alimentos e agricultura Research, Instituto Nacional nos departamento de agricultura (USDA) de alimentos e agricultura, agrícola Experiment Station projeto CA-D-PLS-2332-H, a A.G. e pela UC Davis departamento de planta Ciências através de uma bolsa de J.S.

Materials

1.27 cm diameter PVC pipe JM Eagle 530048 305 cm per box, cut into lengths as specified in the protocol
PVC side elbows Lasco 315498 2 per box
PVC 90-degree elbows Charlotte PVC 02300 0600 4 per box
PVC T joints Charlotte PVC 02402 0600 4 per box
Extruded acrylic panes TAP Plastics N/A 2 per box, 0.64 cm thick x 40.5 cm wide x 61 cm long
HDPE spacers (sides) TAP Plastics N/A 2 per box, 0.64 cm thick x 2.5 cm wide x 57 cm long
HDPE spacers (bottom) TAP Plastics N/A 1 per box, 0.64 cm thick x 2.5 cm wide x 40.5 cm long
HDPE spacers (patch) TAP Plastics N/A 2 per box, 0.64 cm thick x 3.8 cm wide x 28 cm long
Polyester batting Fairfield #A-X90 2.5 cm x 40.5 cm strip per box
20-thread screws N/A N/A 3.2 cm long, 0.64 cm diameter
Washers N/A N/A 0.64 cm internal diameter
Hex nuts N/A N/A sized to fit the screws
Light deprivation fabric Americover, Inc. Bold 8WB26.5 1 piece 95 cm wide and 69 cm long per box
Sand Quikrete No. 1113
Field soil N/A N/A
Transparencies for tracing FXN FXNT1319100S One per side of the box to be traced

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Cite This Article
Schmidt, J. E., Lowry, C., Gaudin, A. C. An Optimized Rhizobox Protocol to Visualize Root Growth and Responsiveness to Localized Nutrients. J. Vis. Exp. (140), e58674, doi:10.3791/58674 (2018).

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