الغدة النخامية جهاز الغدد الصماء رئيسية في الفقاريات الموجودة أدناه تحت المهاد والخلفية إلى chiasm البصرية. وتنتج وتفرز الهرمونات ستة إلى ثمانية من أنواع الخلايا المحددة. هرمونات الغدة النخامية تشكل وسيط بين الدماغ والأجهزة الطرفية ومحرك مجموعة واسعة من العمليات الفسيولوجية الأساسية بما في ذلك النمو والتكاثر، وتنظيم التوازن. مشابهة للخلايا العصبية، خلايا الغدد الصماء الغدة النخامية منفعل كهربائياً مع القدرة على إطلاق إمكانات العمل تلقائياً ¹. ودور هذه إمكانات العمل هو الخلية التابعة. في العديد من أنواع الخلايا في الغدة النخامية الثدييات، إمكانات العمل يمكن أن ترفع داخل الخلية Ca^{2 +} بما فيه الكفاية لإطلاق سراح المطرد لهرمون ². وبالإضافة إلى ذلك، يتلقى الغدة النخامية معلومات محفزة والمثبطة على حد سواء من الدماغ الذي يؤثر على إمكانات غشاء الخلايا ^3،4،،من⁵⁶. عادة، مدخلات تنشيطية يزيد استثارة وغالباً ما ينطوي على إطلاق سراح Ca^{2 +} من مخازن داخل الخلايا، فضلا عن زيادة إطلاق تردد ⁷. فهم كيف يستخدم تكوين قناة أيون الخلية وتتكيف مع هذه الإشارات الإدخال من الدماغ مفتاح لفهم هرمون التجميعي والإفراج.

تقنية التصحيح-المشبك وضعته زاكمان ونيهر^9،،من ⁸¹⁰ في أواخر السبعينات وزيادة تحسين طريق هاميل ¹¹، ويسمح بتحقيقات مفصلة للخصائص الكهربية للخلايا وصولاً إلى قنوات أيون واحد. وعلاوة على ذلك، يمكن استخدام هذه التقنية لدراسة كل من التيار والجهد. واليوم، لقط التصحيح هو المعيار الذهبي لقياس الخصائص الكهربية للخلية. وكانت أربعة تكوينات رئيسية تقنية التصحيح-المشبك ختم ضيق ¹¹من البلدان المتقدمة النمو؛ الخلية-المرفقة والداخل إلى الخارج، الخارج، وتصحيح كامل الخلية. ثلاثة تكوينات الأولى تستخدم عادة للتحقيقات قناة أيون واحد. للدورة الرابعة، بعد تكوين خلية يولي، ثقب في غشاء الخلية باستخدام ضغط الغلاف الجوي الفرعية. يسمح هذا التكوين أيضا التحقيقات المتعلقة بتكوين خلية كله ¹²قناة أيون. بيد أن القيد واحد من هذا الأسلوب أن جزيئات هيولى مخففة بالتصحيح ماصة حل ¹³ (الشكل 1أ)، مما يؤثر على الاستجابات الكهربائية والفسيولوجية للخلايا المدروسة. وفي الواقع، بعض من تلك الجزيئات قد تؤدي أدواراً هامة في توصيل الإشارات أو في تنظيم قنوات أيون مختلفة. لتجنب هذا، وضعت لينداو وفرنانديز ¹⁴ طريقة حيث يتم إضافة مركب تشكيل المسام إلى ماصة التصحيح. بعد تكوين خلية يولي، سوف تدرج في غشاء البلازما تحت التصحيح المجمع والتسلخات ببطء الغشاء إنشاء الاتصال الكهربائية مع سيتوسول (الشكل 1ب). ويمكن استخدام العديد من الأنواع مختلفة مثل النيستاتين ¹⁵ والامفوتريسين ب ¹⁶، أو التوتر السطحي مثل ال ^17،صابونين بيتا-إيسين¹⁸ . إنشاء هذه المركبات المسام كبيرة بما يكفي للسماح بالأيونات الموجبة الفموي الأحادي التكافؤ ونشرها بين في سيتوسول وماصة التصحيح مع الحفاظ على مستويات الجزيئات والايونات أكبر مثل Ca^{2 + 15، سيتوسوليك من Cl– 16}.

ويتمثل التحدي في استخدام التصحيح مثقبة المقاومة سلسلة يحتمل أن تكون عالية. سلسلة المقاومة (R_s) أو الوصول إلى المقاومة هي المقاومة مجتمعة على ماصة التصحيح بالنسبة للأرض. خلال تسجيلات المشبك التصحيح، سيكون R_s بالتوازي مع مقاومة الغشاء (R_م). R_m و R_s في العمل بالتوازي مقسم الجهد. مع ارتفاع R_s، ستسقط الجهد عبر R_s يعطي أخطاء في التسجيلات. الخطأ سوف تصبح أكبر مع التيارات الكبيرة المسجلة. وباﻹضافة إلى ذلك، مقسم الجهد هو أيضا التردد يعتمد إنشاء مرشح تمرير منخفض، مما يؤثر في الأزمنة. في الواقع، التصحيح مثقب قد لا تسمح دائماً تسجيلات تيارات الكبيرة والسريعة مثل الجهد عن طريق بوابة التيارات نا⁺ (لقراءات مفصلة، انظر المرجع ¹⁹). أيضا، قد تختلف R_s أثناء تسجيلات المشبك التصحيح، مرة أخرى مما يؤدي إلى تغييرات في الحالي مسجل. وهكذا، قد تحدث إيجابيات كاذبة في حالات حيث يتغير R_s أثناء تطبيق المخدرات.

الكهربية في الأنسجة شرائح قدم لأول مرة بالمعمل أندرسن لدراسة الخصائص الكهربية للخلايا العصبية في الدماغ ²⁰. الأسلوب الذي مهد الطريق لتحقيقات مفصلة للخلايا المفردة، فضلا عن دوائر الاتصالات وخلية خلية خلية في بيئة سليمة أكثر. تقنية مماثلة لصنع شرائح الغدة النخامية قدم في عام 1998 Guérineau et al. ²¹-ومع ذلك، فإنه لم يكن قبل عام 2005، استخدمت ذلك إعداد شريحة الدماغ-الغدة النخامية بنجاح للدراسات التصحيح-المشبك في تيليوست ²². في هذه الدراسة، ذكر الكتاب أيضا استخدام تسجيلات المشبك التصحيح مثقب. ومع ذلك، حتى الآن، معظم التحقيقات الكهربية من خلايا الغدة النخامية قد أجريت في الثدييات، وحفنة فقط من الفقاريات الأخرى، بما في ذلك الأسماك تيليوست ^1،2،22،23 . في اريوكروماس، وتقريبا جميع دراسات أجريت على خلايا معزولة الابتدائي ^{24،25،26،27،،}من^2829،30 .

في هذه الورقة، فإننا مخطط بروتوكولا أمثل لإعداد شرائح المخ–الغدة النخامية سليمة من الميداكا الأسماك النموذجية. النهج الذي يمثل العديد من المزايا المقارنة للثقافات الخلية ينتابها الأولية. أولاً، يتم تسجيل الخلايا في بيئة المحافظة نسبيا مقارنة بفصل شروط ثقافة الخلية. ثانيا، الأعمال التحضيرية شريحة تسمح لنا بدراسة مسارات غير مباشرة توسط خلية خلية الاتصالات ²²، التي ليس من الممكن في ظروف الثقافة خلية معزولة. وعلاوة على ذلك، نحن لشرح كيفية إجراء التسجيلات الكهربية على شرائح الأنسجة التي تم الحصول عليها استخدام تقنية ثقب كامل الخلية التصحيح-المشبك مع الامفوتريسين B كعامل تشكيل المسام.

الميداكا أسماك المياه العذبة صغيرة أصلي إلى آسيا، وجدت في المقام الأول في اليابان. علم وظائف الأعضاء، وعلم الأجنة، وعلم الوراثة من الميداكا قد درست على نطاق واسع لما يزيد على 100 سنة ³¹، ونموذج بحث شائعة استخدام في العديد من المختبرات. أهمية خاصة لهذه الورقة هو المنظمة المورفولوجية متميزة للمجمع تحت المهاد-النخامية في الأسماك تيليوست: بينما في الثدييات والطيور الخلايا العصبية طائي الإفراج عن الهرمونات العصبية تنظيم خلايا الغدد الصماء الغدة النخامية نظام المدخل لنيافة الوسيط، هناك إسقاطات عصبية مباشرة لطائي من الخلايا العصبية إلى خلايا الغدد الصماء الغدة النخامية في الأسماك تيليوست ³². وهكذا، تجري بعناية تشريح الدماغ-الغدة النخامية له أهمية خاصة في الأسماك، مما يسمح لنا بالتحقيق في الخصائص الكهربية لخلايا الغدة النخامية في شبكة الدماغ-الغدة النخامية الحفاظ عليها جيدا، ولا سيما كيف الغدة النخامية خلايا التحكم استثارة وبالتالي Ca^{2 +} التوازن.