Summary

Optogenetic 쥐 행동에 Hippocampal 세타 진동의 유입

Published: June 29, 2018
doi:

Summary

우리 동작 쥐에서 hippocampal 세타 진동 (5-10 Hz)의 선택적 조작에 대 한 optogenetics 및 electrophysiological 기록의 사용을 설명합니다. 리듬 유입의 효능은 사용 하 여 로컬 필드 가능성을 모니터링 하 고 있다. 광학-및 pharmacogenetic 저해의 조합 해결 hippocampal 동기화의 원심 판독 합니다.

Abstract

동작에 신경 네트워크 진동의 관계와 두뇌 지역에 걸쳐 신경 방전의 조직에 광범위 한 데이터를 선택적으로 뇌 리듬을 조작 하는 새로운 도구에 대 한 호출 합니다. 여기는 동작 쥐에서 hippocampal 세타 진동 (5-10 Hz)의 높은 제어를 위한 세포 외 전기 생리학 프로젝션 전용 optogenetics를 결합 하는 접근에 설명 합니다. Optogenetic 유입의 특이성 중간 septal 셀, hippocampal 세타 진동의 발생에 결정적인 관여 GABAergic 인구 channelrhodopsin-2 (ChR2)을 대상으로 이루어집니다 그리고 로컬 동기화 활성화 해 마에 금지 septal afferents의 하위 집합입니다. Optogenetic 리듬 컨트롤의 효능 CA1 영역의 또는 신경 방전의 lamina에 걸쳐 로컬 필드 가능성 (LFP)의 동시 모니터링 하 여 확인 됩니다. 이 쉽게 구현 준비를 사용 하 여 우리가 세타 진동의 유도 및 그들의 주파수 및 규칙의 조작에 대 한 다양 한 optogenetic 자극 프로토콜의 효능을 보여줍니다. 마지막으로, 프로젝션 전용 억제와 세타 리듬 컨트롤의 조합 원심 영역 hippocampal 동기화의 특정 측면의 판독을 해결합니다.

Introduction

포유류의 신경 활동은 정보 전송 시간과 뇌 영역1,2,,34사이 지원 네트워크 진동에 의해 조정 됩니다. 뇌 리듬 포함 매우 느린 ( 200 Hz) 주파수에서 배열 하는 진동. 증거의 큰 몸 인식5,6,7,,89,10 포함 하 여 다양 한 뇌 기능에 네트워크 진동의 참여 지원 , 파 킨 슨 병과 간 질13,,1415등 정신병 질환 뿐 아니라 타고 난 행동11,12 . 네트워크 진동의 실험 조작에 대 한 선택적이 고 일시적으로 정확한 방법 따라서 동기화의 순수 그럴듯한 모델의 개발 및 행동 인과 링크를 설정 하기 위한 필수적입니다.

네트워크 동기화는 다양 한 생물 학적 기판 및 프로세스, 흥분 및 네트워크 연결의 neuromodulation 이온 채널의 분자 id 및 그들의 활동에서 배열에 의해 중재 됩니다. 많은 뇌 리듬, 어떤 (예를 들어, 주파수, 진폭)의16 를 공개 하는 발전기는 리듬의 생물학적 설계 뚜렷한 세포 유형 및 네트워크의 역학에 대해 가져온. 예를 들어, 금지 수 주 셀 somata를 대상으로 주파수 대역 및 뇌 영역17,18, 세타19,20, 감마20 를 포함 하 여 가장 중요 한 선수는 , 21, 그리고 리플 (140-200 Hz)22 진동. 차례 차례로, 먼 셀의 위상 동기화 강력한 피드 포워드 신호 피라미드 세포의 수의 발사를 다시 설정 하 여 보장 됩니다. 진동, 동기화 된 신경 인구 크기의 중요 한 매개 변수 측정된 LFP 진동의 진폭에 밀접 하 게 관련 하 고, 적어도 빠른 진동에 따라 달라 집니다 수2에 흥분 성의 드라이브. 델타와 세타 리듬, 같은 느린 진동 cortico thalamic23,24 hippocampal 중간 septal 예측25, 에 의해 형성 된 장거리 재진입 루프에 의해 생성 되는 반면, 26,27, 각각. 같은 회로에 진동 신호 전파 지연, 고르기, 반응과 참여 셀28,,2930, 에 그들의 주파수 설정의 상호 작용에 의해 초래 됩니다. 31 , 32. GABAergic parvalbumin (태양광 발전)에서 억제 계획-해 마25,33, parahippocampal 지역에 entorhinal 외피26 수를 중간 심장 (MS)의 세포는 긍정적인 내측 측 두 엽에 세타 진동의 세대에 대 한 필수. 따라서, 네트워크 진동 및 신경 동기화의 생리 적 메커니즘 실시간 정밀 optogenetics를 사용 하 여 조작할 수 있습니다.

셀 형식 관련 optogenetic 조작 hippocampal 및 대뇌 피 질의 진동 체 외에서34,35,36,37,38 의 연구에 대 한 적용 된 vivo에서30,39,40,41,,4243,44,45, 기능 포함 감마5,12,36,,4647,48,49,50, 의 조사 51,52 및 리플 진동40,,5354 와 잠 스핀 들55,56. 최근 우리 PV-Cre 쥐의 MS, hippocampal 세타 리듬의 세대에 대 한 주요 영역에서에서 Cre 종속 ChR2 바이러스 표현. 이 준비를 사용 하 여, hippocampal 세타 진동 (주파수와 시간적 안정성)의 기능 해 마11에서 MS의 억제 계획의 optogenetic 자극에 의해 통제 되었다. 또한, 금지 중 hippocampal 예측의 세타 주파수 optogenetic 자극 깨어 부동 중 세타 리듬을 되 살려. optogenetically 최 LFP 및 신경 활동 수준에서 마우스에 자발적인 세타 진동의 세타 리듬 표시 속성.

이 프로토콜의 주요 기능 포함: hippocampal 흥분;에 난다 효과 피하는 동안 자발적인 세타 진동에 대 한 생리 적으로 중요 한 이다 억제 경로 (1) 활용 (2) axonal, , 비 hippocampal MS efferents;에 직접적인 영향을 최소화 하기 위해 프로젝션 특정 자극 (3) 로컬 세타 리듬 빛 자극, 세타 리듬 중 hippocampal 역학와 세타 진동;의 글로벌 양자 유입 최소한의 직접 간섭을 보장 (4) 파라미터 제어 세타 진동 주파수 및 규칙; 그리고 (5) 부 량 유입 충실도 높은 시간 해상도 LFP를 사용 하 여 동물 행동에 양적 인과 분석. 때문에이 준비는 세타 세대25,30중 hippocampal disinhibition의 잘 알려진 역할에 기본적으로 대문자로 표시, 강력한 제어할을 동작 쥐에 세타 진동의 여러 매개 변수를 수 있습니다. 연구 적은 조사 경로 세포 종류 중 hippocampal 회로의 다른 있던 조작38,,3947,49,50,51 , 52 , 53 , 54 , 55 , 56 , 57 , 58 공개 더 세타 리듬의 메커니즘.

Protocol

PV-Cre 남성 쥐 노크에서59, 10-25 주 이전, 사용 되었다. 쥐 동물 시설에서 표준 조건 하에서 지 내게 되었고 12 h 명암 주기에 보관. 모든 절차 국내 및 국제 지침에 따라 수행 하 고 지역 보건 당국 (Landesamt 위한 Natur, Umwelt und Verbraucherschutz, 노르 트 베스트 팔 렌)에 의해 승인 했다. 1. 바이러스 주입 전체 절차 동안 생물 안전 지침60를 따르…

Representative Results

섹션 1에서에서 설명한 대로 MS GABAergic 셀으로 ChR2의 타겟팅은 그림 2A에 나와 있습니다. Optogenetic 자극 등 해 마 CA1 영역 위에 이식 하는 광학 섬유를 통해 MS GABAergic 세포의 축 삭의이 세타 동측 (그림 2B)에 자극의 주파수에서 진동 contralateral 뿐만 아니라 반구 (그림 2C)입니다. 세타 진동의 효능 상대 세타 자…

Discussion

여기 우리는 끌고가 다 hippocampal 세타 진동 동작 동물에서을 유도 하는 광범위 하 게 액세스할 수 있는 방법론을 제시. 이 방법은 정보 처리 및 동작에 세타 리듬의 기능 연구에 대 한 유용할 수 있습니다. 이 방법의 중요 한 측면을 포함 한다: (1)는 opsin의 선택과 ChR2의 MS의 축 삭을 대상으로 세포 해 마, 지속적인 자극 및 LFP 이식된 광학 섬유 선 배열 어셈블리의 (2) 강력한 광학 및 전기 기능 행동 ?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

우리는 마리아 Gorbati에 대 한 데이터 분석 전문가 도움말 및 의견에 대 한 제니퍼 Kupferman 원고에 감사 하 고 싶습니다. 이 작품은 도이치 가운데 (DFG;에 의해 지원 되었다 257 실 NeuroCure, TK 및 AP; 우선 프로그램 1665, 1799/1-1(2), Heisenberg 프로그램, 1799/2-1, AP), 독일-이스라엘 기초 과학 연구 및 개발 (GIF; 나-1326-421.13/2015, TK)와 인간 프론티어 과학 프로그램 (HFSP; RGY0076/2012, TK).

Materials

PV-Cre mice The Jackson Laboratory B6;129P2-Pvalbtm1(cre)Arbr/J
Name Company Catalog Number Comments
Surgery
Stereotaxis David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA Model 963 Ultra Precise Small Animal Stereotaxic Instrument
Drill bits, 0.8 mm Bijoutil, Allschwil, Switzerland 49080HM
0.01-1 ml syringe Braun, Melsungen, Germany 9161406V
Sterican cannulas Braun 26 G, 0.45×25 mm BL/LB
Fine and sharp scissors Fine Science Tools Inc., Vancouver, Canada 14060-09
Forceps Fine Science Tools Inc. 11210-10 Dumont AA – Epoxy Coated Forceps
Blunt stainless steel scissors Fine Science Tools Inc. 14018-14
Soldering station Weller Tools GmbH, Besigheim, Germany WSD 81
Erythromycin Rotexmedica GmbH, Trittau, Germany PZN: 10823932 1g Powder for Solution for Infusion
Name Company Catalog Number Comments
Optogenetics
Hamilton pump PHD Ultra, Harvard Apparatus, Holliston, MA, USA model 703008 PHD Ultra Syringe Pump with push/pull mechanism
Hamilton 5 µL Syringe, 26 gauge PHD Ultra, Harvard Apparatus Model 75 RN SYR
Hamilton 5 µL Plunger PHD Ultra, Harvard Apparatus Model 75 RN SYR
Tubing Fisher Scientific, Pittsburgh, USA PE 20 Inner diameter 0.38 mm (.015"), Outer diameter 1.09 mm (.043")
Sterican cannulas Braun, Melsungen, Germany 27 G, 25×0.40 mm, blunt
Precision drill/grinder Proxxon, Wecker, Luxemburg fbs 240/e
Cutting disks Proxxon NO 28812
Cre dependent channelrhodopsin Penn Vector Core, Philadelphia, PA, USA AV-1-18917P Contruct name: AAV2/1.CAGGS.flex.ChR2.tdTomato, titer: 1.42×1013 vg/ml
Cam kinase dependent halorhodopsin Penn Vector Core AV-1-26971P Construct name: eNpHR3.0, AAV2/1.CamKIIa.eNpHR3.0-EYFP.WPRE.hGH, titer: 2.08_1012 vg/ml
Multimode optic fiber ThorLabs, Dachau, Germany FG105LCA 0.22 NA, Low-OH, Ø105 µm Core, 400 – 2400 nm
Ceramic stick ferrule Precision Fiber Products, Milpitas, CA, USA CFLC126 Ceramic LC MM Ferrule, ID 126um
Polishing paper Thorlabs LF3D 6" x 6" Diamond Lapping (Polishing) Sheet
Power meter Thorlabs PM100D Compact Power and Energy Meter Console, Digital 4" LCD
Multimode fiber optic coupler Thorlabs FCMM50-50A-FC 1×2 MM Coupler, 50:50 Split Ratio, 50 µm GI Fibers, FC/PC
Fiberoptic patch cord Thorlabs FG105LCA CUSTOM-MUC custom made, 3 m long, with protective tubing, Tubing: FT030, Connector 1: FC/PC, Connector 2: 1.25mm (LC) Ceramic Ferrule
Sleeve Precision Fiber Products, Milpitas, CA, USA ADAL1 Ceramic Split Mating Sleeve for Ø1.25 mm (LC/PC) Ferrules
473 nm DPSS laser Laserglow Technologies, Toronto, ON, Canada R471005FX LRS-0473 Series
593 nm DPSS laser Laserglow Technologies R591005FX LRS-0594 Series
MC_Stimulus II Multichannel Systems, Reutlingen, Germany STG 4004
Impedance conditioning module Neural microTargeting worldwide, Bowdoin, USA ICM
Name Company Catalog Number Comments
Electrophysiology
Tungsten wires California Fine Wire Company, Grover Beach, CA, USA CFW0010954 40 µm, 99.95%
Capillary tubing Optronics 1068150020 ID: 100.4 µm
Omnetics nanoconnector Omnetics Connector Corporation, Minneapolis, USA A79038-001
Screws Bilaney, Düsseldorf, Germany 00-96×1/16 stainless-steel
Silicone probe NeuroNexus Technologies, Ann Arbor, MI, USA B32
Headstage Neuralynx, Bozeman, Montana USA HS-8 miniature headstage unity gain preamplifiers
Silver conductive paint Conrad electronics, Germany 530042
Liquid flux Felder GMBH Löttechnik, Oberhausen, Germany Lötöl ST DIN EN 29454.1, 3.2.2.A (F-SW 11)
LED Neuralynx HS-LED-Red-omni-10V
Name Company Catalog Number Comments
Software
MATLAB Mathworks, Natick, MA, USA
MC_Stimulus software Multichannel, Systems
Neurophysiological Data Manager NDManager, http://neurosuite.sourceforge.net
Klusters http://neurosuite.sourceforge.net, Hazan et al., 2006
Software of the recording system Neuralynx Cheetah https://neuralynx.com/software/cheetah
Multi-channel data analysis software Cambridge Electronic Design Limited, Cambridge, GB Spike2

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Bender, F., Korotkova, T., Ponomarenko, A. Optogenetic Entrainment of Hippocampal Theta Oscillations in Behaving Mice. J. Vis. Exp. (136), e57349, doi:10.3791/57349 (2018).

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