우리 동작 쥐에서 hippocampal 세타 진동 (5-10 Hz)의 선택적 조작에 대 한 optogenetics 및 electrophysiological 기록의 사용을 설명합니다. 리듬 유입의 효능은 사용 하 여 로컬 필드 가능성을 모니터링 하 고 있다. 광학-및 pharmacogenetic 저해의 조합 해결 hippocampal 동기화의 원심 판독 합니다.
동작에 신경 네트워크 진동의 관계와 두뇌 지역에 걸쳐 신경 방전의 조직에 광범위 한 데이터를 선택적으로 뇌 리듬을 조작 하는 새로운 도구에 대 한 호출 합니다. 여기는 동작 쥐에서 hippocampal 세타 진동 (5-10 Hz)의 높은 제어를 위한 세포 외 전기 생리학 프로젝션 전용 optogenetics를 결합 하는 접근에 설명 합니다. Optogenetic 유입의 특이성 중간 septal 셀, hippocampal 세타 진동의 발생에 결정적인 관여 GABAergic 인구 channelrhodopsin-2 (ChR2)을 대상으로 이루어집니다 그리고 로컬 동기화 활성화 해 마에 금지 septal afferents의 하위 집합입니다. Optogenetic 리듬 컨트롤의 효능 CA1 영역의 또는 신경 방전의 lamina에 걸쳐 로컬 필드 가능성 (LFP)의 동시 모니터링 하 여 확인 됩니다. 이 쉽게 구현 준비를 사용 하 여 우리가 세타 진동의 유도 및 그들의 주파수 및 규칙의 조작에 대 한 다양 한 optogenetic 자극 프로토콜의 효능을 보여줍니다. 마지막으로, 프로젝션 전용 억제와 세타 리듬 컨트롤의 조합 원심 영역 hippocampal 동기화의 특정 측면의 판독을 해결합니다.
포유류의 신경 활동은 정보 전송 시간과 뇌 영역1,2,,34사이 지원 네트워크 진동에 의해 조정 됩니다. 뇌 리듬 포함 매우 느린 ( 200 Hz) 주파수에서 배열 하는 진동. 증거의 큰 몸 인식5,6,7,,89,10 포함 하 여 다양 한 뇌 기능에 네트워크 진동의 참여 지원 , 파 킨 슨 병과 간 질13,,1415등 정신병 질환 뿐 아니라 타고 난 행동11,12 . 네트워크 진동의 실험 조작에 대 한 선택적이 고 일시적으로 정확한 방법 따라서 동기화의 순수 그럴듯한 모델의 개발 및 행동 인과 링크를 설정 하기 위한 필수적입니다.
네트워크 동기화는 다양 한 생물 학적 기판 및 프로세스, 흥분 및 네트워크 연결의 neuromodulation 이온 채널의 분자 id 및 그들의 활동에서 배열에 의해 중재 됩니다. 많은 뇌 리듬, 어떤 (예를 들어, 주파수, 진폭)의16 를 공개 하는 발전기는 리듬의 생물학적 설계 뚜렷한 세포 유형 및 네트워크의 역학에 대해 가져온. 예를 들어, 금지 수 주 셀 somata를 대상으로 주파수 대역 및 뇌 영역17,18, 세타19,20, 감마20 를 포함 하 여 가장 중요 한 선수는 , 21, 그리고 리플 (140-200 Hz)22 진동. 차례 차례로, 먼 셀의 위상 동기화 강력한 피드 포워드 신호 피라미드 세포의 수의 발사를 다시 설정 하 여 보장 됩니다. 진동, 동기화 된 신경 인구 크기의 중요 한 매개 변수 측정된 LFP 진동의 진폭에 밀접 하 게 관련 하 고, 적어도 빠른 진동에 따라 달라 집니다 수2에 흥분 성의 드라이브. 델타와 세타 리듬, 같은 느린 진동 cortico thalamic23,24 hippocampal 중간 septal 예측25, 에 의해 형성 된 장거리 재진입 루프에 의해 생성 되는 반면, 26,27, 각각. 같은 회로에 진동 신호 전파 지연, 고르기, 반응과 참여 셀28,,2930, 에 그들의 주파수 설정의 상호 작용에 의해 초래 됩니다. 31 , 32. GABAergic parvalbumin (태양광 발전)에서 억제 계획-해 마25,33, parahippocampal 지역에 entorhinal 외피26 수를 중간 심장 (MS)의 세포는 긍정적인 내측 측 두 엽에 세타 진동의 세대에 대 한 필수. 따라서, 네트워크 진동 및 신경 동기화의 생리 적 메커니즘 실시간 정밀 optogenetics를 사용 하 여 조작할 수 있습니다.
셀 형식 관련 optogenetic 조작 hippocampal 및 대뇌 피 질의 진동 체 외에서34,35,36,37,38 의 연구에 대 한 적용 된 vivo에서30,39,40,41,,4243,44,45, 기능 포함 감마5,12,36,,4647,48,49,50, 의 조사 51,52 및 리플 진동40,,5354 와 잠 스핀 들55,56. 최근 우리 PV-Cre 쥐의 MS, hippocampal 세타 리듬의 세대에 대 한 주요 영역에서에서 Cre 종속 ChR2 바이러스 표현. 이 준비를 사용 하 여, hippocampal 세타 진동 (주파수와 시간적 안정성)의 기능 해 마11에서 MS의 억제 계획의 optogenetic 자극에 의해 통제 되었다. 또한, 금지 중 hippocampal 예측의 세타 주파수 optogenetic 자극 깨어 부동 중 세타 리듬을 되 살려. optogenetically 최 LFP 및 신경 활동 수준에서 마우스에 자발적인 세타 진동의 세타 리듬 표시 속성.
이 프로토콜의 주요 기능 포함: hippocampal 흥분;에 난다 효과 피하는 동안 자발적인 세타 진동에 대 한 생리 적으로 중요 한 이다 억제 경로 (1) 활용 (2) axonal, 즉, 비 hippocampal MS efferents;에 직접적인 영향을 최소화 하기 위해 프로젝션 특정 자극 (3) 로컬 세타 리듬 빛 자극, 세타 리듬 중 hippocampal 역학와 세타 진동;의 글로벌 양자 유입 최소한의 직접 간섭을 보장 (4) 파라미터 제어 세타 진동 주파수 및 규칙; 그리고 (5) 부 량 유입 충실도 높은 시간 해상도 LFP를 사용 하 여 동물 행동에 양적 인과 분석. 때문에이 준비는 세타 세대25,30중 hippocampal disinhibition의 잘 알려진 역할에 기본적으로 대문자로 표시, 강력한 제어할을 동작 쥐에 세타 진동의 여러 매개 변수를 수 있습니다. 연구 적은 조사 경로 세포 종류 중 hippocampal 회로의 다른 있던 조작38,,3947,49,50,51 , 52 , 53 , 54 , 55 , 56 , 57 , 58 공개 더 세타 리듬의 메커니즘.
여기 우리는 끌고가 다 hippocampal 세타 진동 동작 동물에서을 유도 하는 광범위 하 게 액세스할 수 있는 방법론을 제시. 이 방법은 정보 처리 및 동작에 세타 리듬의 기능 연구에 대 한 유용할 수 있습니다. 이 방법의 중요 한 측면을 포함 한다: (1)는 opsin의 선택과 ChR2의 MS의 축 삭을 대상으로 세포 해 마, 지속적인 자극 및 LFP 이식된 광학 섬유 선 배열 어셈블리의 (2) 강력한 광학 및 전기 기능 행동 ?…
The authors have nothing to disclose.
우리는 마리아 Gorbati에 대 한 데이터 분석 전문가 도움말 및 의견에 대 한 제니퍼 Kupferman 원고에 감사 하 고 싶습니다. 이 작품은 도이치 가운데 (DFG;에 의해 지원 되었다 257 실 NeuroCure, TK 및 AP; 우선 프로그램 1665, 1799/1-1(2), Heisenberg 프로그램, 1799/2-1, AP), 독일-이스라엘 기초 과학 연구 및 개발 (GIF; 나-1326-421.13/2015, TK)와 인간 프론티어 과학 프로그램 (HFSP; RGY0076/2012, TK).
PV-Cre mice | The Jackson Laboratory | B6;129P2-Pvalbtm1(cre)Arbr/J | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Surgery | |||
Stereotaxis | David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 963 | Ultra Precise Small Animal Stereotaxic Instrument |
Drill bits, 0.8 mm | Bijoutil, Allschwil, Switzerland | 49080HM | |
0.01-1 ml syringe | Braun, Melsungen, Germany | 9161406V | |
Sterican cannulas | Braun | 26 G, 0.45×25 mm BL/LB | |
Fine and sharp scissors | Fine Science Tools Inc., Vancouver, Canada | 14060-09 | |
Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11210-10 | Dumont AA – Epoxy Coated Forceps |
Blunt stainless steel scissors | Fine Science Tools Inc. | 14018-14 | |
Soldering station | Weller Tools GmbH, Besigheim, Germany | WSD 81 | |
Erythromycin | Rotexmedica GmbH, Trittau, Germany | PZN: 10823932 | 1g Powder for Solution for Infusion |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Optogenetics | |||
Hamilton pump | PHD Ultra, Harvard Apparatus, Holliston, MA, USA | model 703008 | PHD Ultra Syringe Pump with push/pull mechanism |
Hamilton 5 µL Syringe, 26 gauge | PHD Ultra, Harvard Apparatus | Model 75 RN SYR | |
Hamilton 5 µL Plunger | PHD Ultra, Harvard Apparatus | Model 75 RN SYR | |
Tubing | Fisher Scientific, Pittsburgh, USA | PE 20 | Inner diameter 0.38 mm (.015"), Outer diameter 1.09 mm (.043") |
Sterican cannulas | Braun, Melsungen, Germany | 27 G, 25×0.40 mm, blunt | |
Precision drill/grinder | Proxxon, Wecker, Luxemburg | fbs 240/e | |
Cutting disks | Proxxon | NO 28812 | |
Cre dependent channelrhodopsin | Penn Vector Core, Philadelphia, PA, USA | AV-1-18917P | Contruct name: AAV2/1.CAGGS.flex.ChR2.tdTomato, titer: 1.42×1013 vg/ml |
Cam kinase dependent halorhodopsin | Penn Vector Core | AV-1-26971P | Construct name: eNpHR3.0, AAV2/1.CamKIIa.eNpHR3.0-EYFP.WPRE.hGH, titer: 2.08_1012 vg/ml |
Multimode optic fiber | ThorLabs, Dachau, Germany | FG105LCA | 0.22 NA, Low-OH, Ø105 µm Core, 400 – 2400 nm |
Ceramic stick ferrule | Precision Fiber Products, Milpitas, CA, USA | CFLC126 | Ceramic LC MM Ferrule, ID 126um |
Polishing paper | Thorlabs | LF3D | 6" x 6" Diamond Lapping (Polishing) Sheet |
Power meter | Thorlabs | PM100D | Compact Power and Energy Meter Console, Digital 4" LCD |
Multimode fiber optic coupler | Thorlabs | FCMM50-50A-FC | 1×2 MM Coupler, 50:50 Split Ratio, 50 µm GI Fibers, FC/PC |
Fiberoptic patch cord | Thorlabs | FG105LCA CUSTOM-MUC | custom made, 3 m long, with protective tubing, Tubing: FT030, Connector 1: FC/PC, Connector 2: 1.25mm (LC) Ceramic Ferrule |
Sleeve | Precision Fiber Products, Milpitas, CA, USA | ADAL1 | Ceramic Split Mating Sleeve for Ø1.25 mm (LC/PC) Ferrules |
473 nm DPSS laser | Laserglow Technologies, Toronto, ON, Canada | R471005FX | LRS-0473 Series |
593 nm DPSS laser | Laserglow Technologies | R591005FX | LRS-0594 Series |
MC_Stimulus II | Multichannel Systems, Reutlingen, Germany | STG 4004 | |
Impedance conditioning module | Neural microTargeting worldwide, Bowdoin, USA | ICM | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Electrophysiology | |||
Tungsten wires | California Fine Wire Company, Grover Beach, CA, USA | CFW0010954 | 40 µm, 99.95% |
Capillary tubing | Optronics | 1068150020 | ID: 100.4 µm |
Omnetics nanoconnector | Omnetics Connector Corporation, Minneapolis, USA | A79038-001 | |
Screws | Bilaney, Düsseldorf, Germany | 00-96×1/16 | stainless-steel |
Silicone probe | NeuroNexus Technologies, Ann Arbor, MI, USA | B32 | |
Headstage | Neuralynx, Bozeman, Montana USA | HS-8 | miniature headstage unity gain preamplifiers |
Silver conductive paint | Conrad electronics, Germany | 530042 | |
Liquid flux | Felder GMBH Löttechnik, Oberhausen, Germany | Lötöl ST | DIN EN 29454.1, 3.2.2.A (F-SW 11) |
LED | Neuralynx | HS-LED-Red-omni-10V | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Software | |||
MATLAB | Mathworks, Natick, MA, USA | ||
MC_Stimulus software | Multichannel, Systems | ||
Neurophysiological Data Manager | NDManager, http://neurosuite.sourceforge.net | ||
Klusters | http://neurosuite.sourceforge.net, Hazan et al., 2006 | ||
Software of the recording system | Neuralynx | Cheetah | https://neuralynx.com/software/cheetah |
Multi-channel data analysis software | Cambridge Electronic Design Limited, Cambridge, GB | Spike2 |