تحليل الناجم عن حمض الريتينويك العصبية تمايز الخلايا الجذعية الجنينية الماوس في الهيئات مضغي اثنين وثلاثة الأبعاد

المجالس الاقتصادية والاجتماعية تنشأ من الكيسة الكتلة الخلوية الداخلية. هذه الخلايا هي المحفزة، أي أنها تملك القدرة على التمايز إلى أي نوع من الخلايا في الكائن الأصلي. ESC في المختبر التمايز هو من اهتمام واسع كنظام تجريبي للتحقيق في مسارات وآليات التنموية. ويقدم نظام نموذجي قوي ومرن لاختبار أساليب علاجية جديدة لتصحيح الخلايا والأنسجة الخلل. EBS تلخيص جوانب كثيرة من تمايز الخلايا خلال مرحلة التطور الجنيني المبكر. على وجه الخصوص، EBS يمكن استخدامها عند الفتك الجنينية يجعل من الصعب تحديد الأساس الخلوي للعيوب الجنينية ^{1 و 2.} EBS يمكن أن تتكون إما من قبل قطرة شنقا أو تقنيات تعليق السائلة ^3. ميزة السابق هو القدرة على توليد EBS من حجم ثابت وكثافة، مما يسهل استنساخ التجربة.

<p cمعشوقة = "jove_content"> التفاعل مع الخلية البروتينات التصاق مصفوفة (ECM) قد تؤثر على القدرة على الحركة وبقاء الخلايا الملتصقة. في نظام الثقافة 2D، وغالبا ما يتم تطبيق فبرونيكتين لزيادة التصاق الخلية إلى الركيزة. فبرونيكتين عنصرا الصفيحة القاعدية التي تعترف بها 10 أنواع من سطح الخلية إنتغرين heterodimers ^4.

RA هو الأيض للدهون صغيرة من فيتامين (أ) الذي يسبب العصبية التمايز ^{5، 6.} تركيزات عالية من RA تعزيز التعبير الجيني العصبي وتقمع التعبير الجيني أرومية متوسطة خلال تشكيل EB ^{7 و 8.} ويتم إنتاج RA فيتامين ألف الأكسدة لريتينالديهيد إما عن طريق الكحول أو الريتينول نازعة، تليها الأكسدة ريتينالديهيد إلى المنتج النهائي من قبل ريتينالديهيد نازعة ^9. التمايز العصبي يتطلب نقل RA من السيتوبلازم إلى النواة التي الخلوي ملزم RA بروتين 2 (CRABP2). في النواة، RA تربط لمجمعها مستقبلات وما شابه ذلك تتألف من مغاير RAR-RXR ^10. وهذا يؤدي إلى توظيف النسخي شارك في تفعيل، والشروع في النسخ ^{9 و 11.} وعلاوة على ذلك، RA يعزز تدهور فسفرته (نشط) SMAD1، وبالتالي استعداء BMP وSMAD يشير ^12. وبالإضافة إلى هذه الأنشطة، RA يزيد التعبير Pax6، وهو عامل النسخ التي تدعم العصبية التمايز ^13. والتضمين إشارات RA التي كتبها sirtuin-1 (SIRT1)، وثنائي النوكليوتيد الأدينين نيكوتيناميد النووي (NAD +) – انزيم يعتمد ذلك deacetylates CRABP2، والتدخل مع النبات لالنواة، وبالتالي مع RA ملزمة لمغاير RAR-RXR ^{14، 15، 16.}

e_content "> هدفنا في تصميم بروتوكول EB تعامل RA-الموصوفة هنا هو تحسين التمايز العصبي من أجل تسهيل في المختبر تحليل مسارات الإشارات التي تنظم ESC التمايز في الخلايا العصبية السلائف. واحدة من مزايا هذا البروتوكول هو تيسير تحليل وظيفة الخلية التي كتبها المناعي. 3D EBS لم يتم اختراقها بشكل جيد من قبل الأجسام المضادة ويصعب الصورة. تفارق EB إلى أحادي الطبقة 2D في نقطة زمنية محددة خلال التمايز العصبي يسهل immunolabeling والتصوير من الخلايا عن طريق الفحص المجهري متحد البؤر.