Hurtig Molekylær Detection og Differentiering af Influenza Virus A og B

Influenzavirusinfektioner resultere i en betydelig mængde af sygelighed og dødelighed hvert år ^{1, 2, 3.} Ukompliceret influenza er præget af forfatningsmæssige og respiratoriske symptomer som feber, muskelsmerter, hovedpine, og ikke-produktiv hoste ^{4, 5.} Ældre individer, unge børn, immunsvækkede patienter og patienter med underliggende co-morbiditet er på et højere risiko for alvorlige komplikationer som lungebetændelse, myocarditis, sygdom i centralnervesystemet, eller død ^{6, 7.}

Influenza-infektion er unik fra andre respiratoriske virus i at hurtig administration af antiviral behandling inden for 48 timer fra symptomdebut kan reducere sygdommens sværhedsgrad og længde ^8. Hurtig identifikation af influenza har også væretvist sig at reducere brugen af unødvendige antibiotika ^{9, 10.} Endvidere skal hospitalsindlagte patienter med influenza-infektioner placeres i isolerede rum med passende infektionskontrol forholdsregler. respiratoriske sygdomme forårsaget af ikke-influenzavirus, kan dog være svært at klinisk skelne fra influenza. Af denne grund, hurtig og nøjagtig diagnostisk test for influenza er meget vigtigt for den kliniske behandling patient.

Flere analyser er tilgængelige til påvisning og identifikation af influenzavirus. Rapid influenza antigen test til påvisning (RIDTs) er meget udbredt i klinisk praksis som point-of-care test, fordi de er enkle at bruge og giver resultater inden for 15 til 30 minutter ^{11, 12;} Men deres følsomheder varierer meget (10-80%), afhængigt af producenten, og befolkningen bliver testet, og den type influenza og subtype ^{13, 14, 15.} Direkte fluorescens assays (DFAs) giver overlegne følsomhed end RIDTs, men behandlingstiden er større (~ 3 timer), og skal være afsluttet af dygtige teknologer ^{16, 17.} Viral kultur har været den gyldne standard for diagnostik influenza og har forbedret følsomhed over begge RIDTs og DFAs ^18. Dog kan influenza viral kultur tage alt fra 2-14 d til at fuldføre, faldende dens anvendelighed i medvirken patientbehandlingen ^19. Endelig har nukleinsyreamplifikationsmetoder tests (NAAT) erstattet dyrkningsteknikker som den nye guldstandard i diagnostik influenza. NAAT anses for at have den største sensitivitet til detektering influenza i et par timer. Imidlertid NAAT er de dyreste assays og kræver specialiseret udstyr og teknikere til at udføre ⁵ <sop>, ^{20, 21, 22, 23, 24, 25.}

Influenza A og B assayet beskrevet her er den første CLIA-frafaldes molekylær hurtige influenza test, der er let tilgængelige. Denne analyse fungerer ved at ansætte en nicking endonuklease Amplification Reaktion (NÆR), der bruger isoterm forstærkning med influenza-specifikke primere efterfulgt af måldetektering med molekylære beaconprober. Dette assay skelner influenza A fra B, kræver 2 min at oprette og behandle en prøve, og kræver i alt 15 min at fuldføre.

Her præsenteres protokollen for Influenza A & B-analysen. Derudover giver vi en prøve datasæt sammenligner ydeevnen af ​​influenza A og B assay på arkiveret nasopharyngeal vatpind (NPS) enheder, lagret i viral transportmedium (VTM) til en anden respiratorisk patogen panel assay.