DNA tiling is an effective approach to make programmable nanostructures. We describe the protocols to construct complex two-dimensional shapes by the self-assembly of single-stranded DNA tiles.
Current methods in DNA nano-architecture have successfully engineered a variety of 2D and 3D structures using principles of self-assembly. In this article, we describe detailed protocols on how to fabricate sophisticated 2D shapes through the self-assembly of uniquely addressable single-stranded DNA tiles which act as molecular pixels on a molecular canvas. Each single-stranded tile (SST) is a 42-nucleotide DNA strand composed of four concatenated modular domains which bind to four neighbors during self-assembly. The molecular canvas is a rectangle structure self-assembled from SSTs. A prescribed complex 2D shape is formed by selecting the constituent molecular pixels (SSTs) from a 310-pixel molecular canvas and then subjecting the corresponding strands to one-pot annealing. Due to the modular nature of the SST approach we demonstrate the scalability, versatility and robustness of this method. Compared with alternative methods, the SST method enables a wider selection of information polymers and sequences through the use of de novo designed and synthesized short DNA strands.
Предыдущая нуклеиновой кислоты самосборка работа 1-25 привел к успешному строительству различных сложных структур, в том числе ДНК 2 – 5,8,10 – 13,17,23 или РНК 7,22 периодическая 3,4,7, 22 и алгоритмическое 5 двумерные решетки, ленты и трубки 10,12 4,12,13, 3D кристаллы 17, 11 и многогранники конечными, 2D форм 7,8. Особенно эффективный метод ДНК-оригами scaffolded, в результате чего один эшафот нить сложена многими коротких вспомогательных цепей основных сформировать сложную форму 9,14 – 16,18 – 21,25.
Мы недавно сообщили, способ построения дискретных наноструктур с заданными 2D форм с использованием одноцепочечной плитки (SST), и продемонстрировал структуры со сложностью, сравнимой с ДНК-оригами 26. Это статьи обе адаптация нашей более ранней работе 26 и подробно описывает протоколы для организации индивидуально адресуемых SSTs в сложных конечных 2D форм с четко заданных размеров (длины и ширины) и морфологии. Одним из ключевых преимуществ метода SST является ее модульность. Каждый компонент ССТ структуры служит модульный блок строительства в сборке, а также различные подмножества этих ТПМ производить различные формы. Таким образом, мы установили общую платформу для построения наноструктур с заданными размерами и формами из коротких, синтетических нитей ДНК.
ТПМ содержит четыре области, каждая длиной 10 или 11 нуклеотидов (рис 1а). В ТПМ связать таким образом, что их параллельные спирали создать решетку ДНК удерживаемых вместе кроссовера связей. Каждый кроссовер фосфата между доменами 2 и 3. Фосфат растягивается искусственно на схемах для наглядности. Кроссоверы расположены два спиральных витков (21 баз) друг от друга (<сильный> 1В). Композитные прямоугольники называются по своим размерам в количестве спиралей и спиральных витков. Например, прямоугольник, что шесть спиралей в ширину и восемь витков спирали длиной ссылаются как 6H × 8Т прямоугольника. ТПМ могут быть опущены, добавляться или иначе переставить, чтобы создать структуры произвольных форм и размеров (рис 1в). Например, прямоугольная конструкция может быть свернута в трубку с нужной длины и радиуса (рис 1D).
В качестве альтернативы, прямоугольная ССТ решетки можно рассматривать как молекулярный холста из SST пикселей, каждый 3 нм 7 нм. В этом исследовании мы используем молекулярную полотно 310 полнометражных внутренних ТПМ, 24 ТПМ полнометражные составляющие левой и правой границы, и 28 половинной длины ТПМ, образующие верхние и нижние границы. Холст имеет 24 двойных спиралей ДНК, связанные с кроссоверов, и каждый спираль содержит 28 витков спирали (294 оснований) и, следовательно, называют24H × 28T прямоугольной холсте. 24H × 28T холсте имеет молекулярную массу, аналогичную из ДНК-оригами структуры, созданной из фага М13 эшафот.
На стадии формирования структуры, важно поддерживать соответствующую концентрацию катионов магния (например., 15 мМ) в цепи ДНК смеси самосборке ДНК-наноструктур. Аналогичным образом, на стадии агарозном геле характеристика / очистки, важно, чтобы соответствующее концентрацию кат?…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа финансировалась Управлением военно-морских исследований молодого исследователя Program Award N000141110914, Управления военно-морских исследований Гранта N000141010827, NSF КАРЬЕРА Award CCF1054898, NIH директора премии Нью-Новатор 1DP2OD007292 и Висс института Биологически Вдохновленный инженерного факультета Startup фонда (в PY) и Центр наук о жизни Startup фонда (в BW) Цинхуа-пекински.
Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
DNA Strands | Integrated DNA Technology | Section 3.1 | |
SYBR Safe DNA gel stain | Invitrogen | S33102 | Section 3.4.2 |
Freeze'N Squeeze DNA Gel Extraction Spin Columns | BIO-RAD | 731-6166 | Section 3.6 |
Bruker's Sharp Nitride Lever Probes | Bruker AFM Probes | SNL10 | Section 4.3 |
Safe Imager 2.0 Blue Light Transilluminator | Invitrogen | G6600 | Section 3.6 |
Centrifuge 5430R | Eppendorf | 5428 000.414 | Section 3.6 |
Transmission Electron Microscope | Jeol | Jem 1400 | Section 7.4 |
Multimode 8 | Veeco | Section 4 | |
Typhoon FLA 9000 Laser Scanner | GE Heathcare Life Sciences | 28-9558-08 | Section 3.5 |
Ultrapure Distilled water | Invitrogen | 10977-023 | Section 3.7.1 |
Mica disk | SPI Supplies | 12001-26-2 | Section 4.1 |
Steel mounting disk | Ted Pella, Inc. | 16218 | Section 4.1 |
carbon coated copper grid for TEM | Electron Microscopy Sciences | FCF400-Cu | Section 7.2 |
tweezers | Dumont | 0203-N5AC-PO | Section 7.31 |
glow discharge system | Quorum Technologies | K100X | Section 7.2 |
DNA Engine Tetrad 2 Peltier Thermal Cycler | BIO-RAD | PTC–0240G | Section 3.3 |
Owl Easycast B2 Mini Gel Electrophoresis Systems | ThermoScientific | B2 | Section 3.4.3 |
Seekam LE Agarose 500G | Lonza | 50004 | Section 3.4.1 |
GeneRuler 1kb Plus DNA Ladder, Ready-To-Use 75-20000bp | ThermoScientific | SM1333 | Section 3.4.4 |
Nanodrop 2000c UV-vis Spectrophotometer | ThermoScientific | Section 3.7 | |
0.2 um filter | Corning Inc. | 431219 | Section 7.1.2 |