L'analyse de neurovasculaire Rénovation dans Entorhino-hippocampe cultures organotypique de tranche

Le système nerveux central est particulièrement sensible à une perte ou une réduction de l'oxygène et de glucose alimentation par le système vasculaire. Même une assez courte interruption de l'approvisionnement en sang au cerveau peut provoquer une perte permanente de la fonction des zones du cerveau concernées mènent aux syndromes de temps typiques. En plus de la perte neuronale dans les zones touchées primaires, il existe généralement une perte neuronale retardée supplémentaire à travers des dommages secondaires. Malheureusement, jusqu'à présent, aucun traitement neuroprotecteur pour la réduction de la mort neuronale secondaire était disponible ^1. Les efforts de recherche pour étudier les mécanismes de dommages secondaires reposent sur ​​l'utilisation de modèles animaux d'ischémie cérébrale comme l'occlusion de l'artère cérébrale moyenne et diverses techniques d'occlusion thrombotique (pour une revue récente, voir ^2). En parallèle, également en raison de limitations d'ordre éthique avec l'utilisation de modèles animaux, la culture organotypique de divers tissus du système nerveux central ont été utilisés qui permettent à l'étudy de réactions neuronales à différents types de blessures ^3-5.

Pour l'étude de la réaction neuronale dans des conditions qui imitent les lésions cérébrales ischémiques, le système de modèle de privation d'oxygène et de glucose (OGD) a été développé. Dans ce modèle, les cultures de tranches sont temporairement exposées à un milieu dépourvu de glucose et a été équilibrée avec de l'azote gazeux en l'absence d'oxygène. Avec un tel traitement, il est possible d'induire une lésion neuronale et la perte qui est assez similaire à celui observé après une lésion ischémique in vivo ^{6, 7.} Dans l'hippocampe, ce traitement induit une perte neuronale dans CA1 spécifiquement, mais pas dans l' région CA3 ou le gyrus denté de l'hippocampe. En revanche, l'étude des réactions vasculaires dans des cultures de tranches jusqu'à présent n'a pas été largement engagé. Une raison évidente est l'absence de circulation et de perfusion vaisseau sanguin dans le modèle de culture de la tranche. Cependant, nous avons montré précédemment qu'il est possible de maintenir bvaisseaux Lood du SNC tranche cultures pendant plusieurs jours ^{8, 9.}

L'objectif global de cette méthode est de surveiller non seulement le sort des neurones après les autres ministères mais étendre l'étude sur le sort et le remodelage du système vasculaire qui est une partie importante de la réponse de blessure. Jusqu'à présent, de telles études ont nécessité l'utilisation de l'expérimentation animale (De Jong et al, 1999;. Cavaglia et al, 2001.). Dans le protocole présenté ici, nous allons détailler la façon dont ces études peut être fait dans les cultures organotypique entorhino-hippocampique attaqué ni à l'hypoxie ou par des lésions excitotoxiques suivie d'une analyse des deux réactions de survie et des vaisseaux sanguins neuronales. Ce protocole est basé sur une étude publiée précédemment sur ​​ce sujet ¹⁰ et peut être utile pour tout laboratoire s'intéresse aux interactions neurovasculaires dans le SNC.