Summary

Sangue secco Spot Raccolta di salute biomarcatori per massimizzare la partecipazione negli studi di popolazione

Published: January 28, 2014
doi:

Summary

I biomarcatori sono indicatori biologici direttamente-misurate di malattia o di salute. Della popolazione e delle scienze sociali, biomarcatori devono essere facile da ottenere, i trasporti, e analizzare. Secchi di sangue Spot (DBS) collezione risponde a questa esigenza, possono essere raccolti in campo con alti tassi di risposta e analizzato per una serie di biomarcatori.

Abstract

I biomarcatori sono indicatori biologici direttamente-misurati di malattia, la salute, esposizioni o altre informazioni biologiche. Della popolazione e delle scienze sociali, biomarcatori devono essere facile da ottenere, i trasporti, e analizzare. Macchie di sangue secco rispondono a questa esigenza, e possono essere raccolti in campo con alti tassi di risposta. Questi elementi sono particolarmente importanti nei disegni di studio longitudinale tra cui interventi in cui l'attrito è fondamentale per evitare, e alti tassi di risposta migliorano l'interpretazione dei risultati. Secca raccolta dei campioni di sangue per il pranzo è semplice, veloce, relativamente indolore, meno invasiva poi prelievo venoso, e richiede minimi requisiti di storage di campo (cioè i campioni non devono essere immediatamente congelato e può essere conservato per un lungo periodo di tempo in un ambiente freezer stabile prima dosaggio). I campioni possono essere analizzati per una varietà di diversi analiti, tra cui il colesterolo, proteina C-reattiva, emoglobina glicosilata, numerose citochine, eoanaliti ther, così come forniscono materiale genetico. Raccolta DBS è raffigurato come impiegato in diversi studi recenti.

Introduction

I biomarcatori possono fornire preziose informazioni sui processi biologici che vanno dal normale patogeni che possono contribuire alla malattia clinicamente identificabili 1. In contesti di ricerca, macchie di sangue essiccato (DBS) stanno diventando sempre preferito per l'iniezione in vena come un metodo per la raccolta di biomarcatori nel sangue intero. Raccolta DBS semplice, di relativamente indolore, meno invasiva poi venipuntura, e richiede requisiti minimi di stoccaggio (cioè campioni non devono essere congelati immediatamente e può essere conservato per un lungo periodo di tempo in un ambiente freezer stabile prima del dosaggio). Campioni DBS possono essere testati per una varietà di diversi analiti, tra cui il colesterolo, proteina C-reattiva, emoglobina glicosilata, anticorpi contro il virus di Epstein-Barr, e diverse citochine.

Venipuntura è stato a lungo il gold standard per la raccolta dei biomarcatori nel sangue. Tuttavia, ottenimento, archiviazione e trasporto dei campioni di sangue richiede aderenza deice ad una serie di protocolli e codici di salute, che non può essere possibile in alcuni protocolli di ricerca. Flebotomi devono essere certificati ufficialmente per prelievo venoso, mentre le procedure di campionamento DBS sono più semplici e non richiedono la certificazione ufficiale. Raccolta di sangue venoso richiede anche più apparecchi di quanto non faccia la raccolta DBS (ad esempio aghi, tubi, tornelli), e lo sforzo più post-raccolta. Campioni vena devono essere trattati (cioè siero o plasma estratto dal campione di sangue mediante centrifugazione o riposo a temperatura ambiente per un determinato periodo di tempo) e congelati tra -20 ° C e -70 ° C immediatamente al fine di impedire il degrado di analiti , mentre i campioni DBS devono semplicemente essere lasciati asciugare all'aria e poi possono essere conservati a temperatura ambiente per una settimana o più a seconda dell'analita, prima del trasferimento ad un congelatore 2. Campioni DBS sono meno costosi per raccogliere campioni di venipuntura per ragioni sopra descritte. Campioni DBS ancheoccupano meno spazio, riducendo i costi di trasporto e stoccaggio prima del dosaggio.

L'uso di saliva come biomarker è diventata la chiave in studi biobehavioral. Saliva offre un metodo semplice e non invasivo per raccogliere i biomarcatori ed è diventato lo standard per il lavoro sul campo finalizzato a misurare il cortisolo o cotinina 3-5. L'urina è un altro campione che possono essere raccolti in modo non invasivo e può essere utilizzato in studi a livello di popolazione per i saggi di melatonina o tossicologia. Mentre sia urina e saliva offrono dritto in avanti le procedure di raccolta che sono in grado di essere completato dai partecipanti stessi, non tutti gli analiti possono essere misurati in questi media.

DBS offre una semplice, conveniente, alternativo al prelievo venoso e stanno diventando uno strumento di ricerca sempre più attuate in campo e in studi di popolazione 6.

Protocol

Il seguente protocollo è stato approvato dal comitato istituzionale di revisione del caso ed è stata condotta in conformità con la Dichiarazione di Helsinki. 1. Prima di iniziare: precuations standard Assicurarsi che tutto il personale collezione di campioni che hanno superato il NIOSH richiesto Sangue patogeno (BBP) Formazione. Controlli tecnici Usa Food and Drug Administration ha approvato contenitori per lo smaltimento taglienti da smaltire utilizzati sterili, monouso lancette. Utilizzare un barile di rifiuti organici adeguatamente etichettati per qualsiasi altro materiale che viene a contatto con materiale potenzialmente infetti. Non riempire troppo il contenitore per rifiuti taglienti. Solo riempire un apposito contenitore a 3/4 della capacità prima di sostituire il contenitore per evitare lesioni. Vi è un indicatore di pienezza compartimentale su ogni contenitore per rifiuti taglienti. Disporre solo di diesis nel contenitore taglienti. Non utilizzare l'apposito contenitore per qualsiasi oti suoi rifiuti. Smaltire qualsiasi materiale nonsharp che viene a contatto con un potenziale BBP in una botte rifiuti organici correttamente etichettati. Dispositivi di Protezione Individuale (DPI) Sempre utilizzare correttamente DPI per la protezione contro l'infezione da BBP. DPI utilizzati nella raccolta degli DBS include i guanti, camici, occhiali protettivi, pantaloni lunghi e scarpe robuste chiuso. Indossare guanti per maneggiare sangue o qualcosa che ha contattato sangue o altri materiali potenzialmente infettivi (OPIMs). I guanti non devono essere troppo forte né troppo debole, in quanto ciò potrebbe ostacolare il processo di "mungitura" (per essere descritto in seguito). Non indossare anelli, mentre la raccolta macchie di sangue in quanto potrebbero perforare il guanto. Indossare un camice da laboratorio per proteggere la pelle e gli indumenti da sangue e OPIMs. Un camice che è venuto in contatto con un BBP devono essere lavati in una soluzione di candeggina / acqua 10% prima del riutilizzo. Indipendentemente dell'esposizione, il camice da laboratorio devono essere lavati regolarmente per tenerlo cmagra. Indossare scarpe chiuse in punta per proteggere i piedi contro il possibile contatto con sangue e OPIMs. Se lo si desidera, indossare occhiali per la protezione contro il possibile contatto con il sangue e OPIMs a causa di splatter. Per mantenere la pulizia di un'area di lavoro, rimuovere tutti i DPI prima di lasciare l'area di lavoro per evitare di contaminare gli elementi al di fuori della zona di laboratorio. Controlli pratica di lavoro Lavare le mani con sapone e acqua calda per 20 secondi prima e dopo il contatto fisico con ogni partecipante. Utilizzare un asciugamano per spegnere l'acqua corrente. Se un lavandino non è disponibile, utilizzare un disinfettante mano di almeno il 60% di alcol. Indipendentemente dalla possibilità di lavarsi le mani, usare alcool disinfettante per le mani prima di applicare e dopo aver tolto i guanti. Usare abbastanza disinfettante per coprire tutte le superfici di entrambe le mani e strofinare le mani fino a secco. Non sciacquare o pulire le mani con un asciugamano in quanto riduce l'efficacia del disinfettante. Non mangiare obere o applicare le lenti a contatto trucco o nelle zone di raccolta sangue. Esposizione personale di BBPS potrebbe avvenire attraverso questi percorsi che sono collegamenti diretti con le mucose. Non maneggiare materiale a rischio biologico senza guanti e non maneggiare materiali non pericolosi con i guanti che hanno precedentemente toccato materiale a rischio biologico. Le pulizie corretta Buona pulizia continuerà ad aiutare a proteggere contro l'esposizione a un BBP e impedirà cross-contaminazione dell'ambiente. Utilizzare virucidi salviettine disinfettanti microbiche correttamente aree pulite contaminate durante la raccolta DBS. Tenere a rischio biologico o rifiuti contaminati separato dalla spazzatura ordinaria; materiali contaminati sono quelli che hanno il sangue o OPIM visibile su di loro. Risposta esposizione Se esposto ad un BBP, rispondere nel seguente modo. Lavare immediatamente e accuratamente l'area esposta con acqua e sapone.Azione rapida può ridurre il rischio di infezione. Identificare la fonte e la via di esposizione per poter spiegare la situazione al supervisore campo e / o il medico risponde. Informare il supervisore di guardia subito dopo che si verifica l'esposizione. Si evidenzia per ottenere il sostegno di un supervisore campo per capire il livello di rischio per l'infezione in modo che possa essere valutato se l'attenzione medica immediata è necessaria. Linee guida disposte in Piani di Controllo di esposizione specifici (ECP) devono essere fornite a tutti quelli che sono in pericolo di essere esposti a BBP. 2. Impostazione di Raccolta camera e Materiali Selezionare una posizione di raccolta del campione che non è destinato a mangiare, come un breakroom, e che è libero di tutte le attrezzature progetto correlato. Uno non vuole essere in una zona che è affollata, ma è importante avere facilità di movimento. Di seguito viene descritto come impostare la raccolta del sangue in loco essiccati (lab) Area. Impostare la canna rifiuti biologici e la linea l'interno con un sacchetto di rifiuti biologici. La canna rifiuti dovrebbe essere accessibile da seduti. Pulire accuratamente la zona di raccolta con salviettine disinfezione o prodotti simili. Smaltire tutto il materiale utilizzato per pulire l'area laboratorio nella canna rifiuti biologici. Indossare i guanti durante questa fase per proteggere la pelle dall'esposizione a sostanze chimiche nocive. Sostituire i guanti e impostare restanti forniture di raccolta. Luogo guanti e alcool disinfettante per le mani sul tavolo di raccolta. Posizionare il contenitore per rifiuti taglienti a portata di sedia del collettore. L'apposito contenitore deve essere maneggiato con i guanti in ogni momento e poi smaltito correttamente quando è piena. Mettere tutti i materiali rimanenti necessari per la raccolta DBS su un underpad di protezione nella zona di raccolta. Includere una carta filtro di raccolta della carta, un paio di lancette, tamponi imbevuti di alcool, garze e cerotti, ma non troppi quindi la zona è ingombra. Farenon impostare più di quello che potrebbe essere utilizzato per ogni partecipante. 3. DBS campione Cellection Indossare sempre DPI (camice, guanti, pantaloni lunghi, scarpe chiuse in punta e, se desiderato, occhiali di sicurezza) durante la raccolta e posizionare un underpad di protezione (chux) al giro di proteggere i propri abiti civili. Preparazione del partecipante: Dopo aver ottenuto il consenso, chiedere al partecipante se lui / lei preferirebbe utilizzare sinistra o destra per la raccolta e selezionare un dito per la raccolta. Evitare (lacerati) le dita callose pesantemente o danneggiati e le eventuali dita inanellate. Tipicamente il mignolo e pollice non sono scelte in modo da minimizzare il dolore partecipante e facilitare la raccolta, rispettivamente. I lati delle dita sono utilizzati come sito di raccolta di coerenza e facilità di raccolta. Hanno il partecipante strofinare le mani insieme per scaldare le mani e stimolare il flusso sanguigno. A wa manormer possono essere utilizzati, o il partecipante potrà eseguire le mani sotto l'acqua calda se il lavandino è disponibile. Un'altra tecnica per stimolare il flusso di sangue sarebbe avere il partecipante alternativamente stringere e rilassare la mano bersaglio, poi riposare completamente prima del polpastrello. Pulire il dito selezionato con un tampone imbevuto di alcol e lasciarlo asciugare completamente. Ripetere con un secondo panno imbevuto di alcol per rimuovere completamente eventuali contaminanti o lozioni per le mani. Il dito deve essere completamente asciutto prima di procedere con il bastone dito o l'alcol sarà contaminare il campione di sangue. Come con tutti i materiali per la raccolta utilizzate, immediatamente disporre dei batuffoli imbevuti di alcol nel contenitore per rifiuti biologici. Preparazione del sito di puntura sul dito del partecipante: Fissare il braccio del partecipante per evitare qualsiasi movimento durante la raccolta e per rilassare il braccio e muscoli della mano. Bracciolo del partecipante sul bordo del tavolo o sulle gambe. Tenere il partecipante mano positioned comodamente sotto il livello del cuore ei muscoli rilassati per facilitare il flusso di sangue. Afferrare il dito prescelto tra il pollice e l'indice e latte delicatamente il dito lentamente e saldamente stringendo il dito mentre si sposta la presa di palma alla punta delle dita per tirare il sangue verso la punta del dito. Premere il micro-lancetta fermamente contro il dito del partecipante perpendicolare al impronte digitali e scaricare la lancetta. Non forare il centro del dito o vicino al letto ungueale; invece mirare tra questi due punti, sul lato ulnare del dito. Smaltire immediatamente la lancetta usata nel contenitore taglienti. Raccogliere le macchie di sangue: Pulire la prima goccia di sangue con una garza sterile per rimuovere il tessuto fluido dal campione e subito smaltire la garza nella canna rifiuti biologici. Pur mantenendo la mano del partecipante di sotto del loro cuore con un angolo verso il basso, gentemente mungere la partenza mano al polso e lavorare fino alla base del dito per produrre sangue. Non basta spremere il dito, in modo da ridurre il flusso sanguigno. Milk il dito fino a quando una grande goccia è appeso dal polpastrello. Raccogliere punti con la carta raccolta. Posizionare accuratamente la carta di raccolta sotto il dito e attendere che la goccia caduta del proprio peso. Questo consente la raccolta di macchie di sangue di volume massimo. Se pozze di sangue sulla carta da filtro, cioè "perle", toccare delicatamente la carta per incoraggiare il sangue a saturare nella carta. Se il sangue è troppo viscoso o gocce sono troppo piccoli per rientrare del proprio peso, portare lentamente la carta di raccolta a contatto con la goccia di sangue per assorbire il sangue dal dito tramite azione capillare senza toccare il dito. Se il dito tocca la carta raccolta, spostarsi in un altro punto sulla carta come quella zona di raccolta è stata compromessa. Dito sho del partecipanteULD non toccare mai il filtro di carta. Non mettere gocce di sangue su uno sopra l'altro, anche se una macchia di sangue non riempie il cerchio collezione. Non lasciate correre il sangue verso il basso il dito o sul unghia in quanto ciò rende collezione di grandi macchie più difficili. Se il sangue del partecipante coagula in qualsiasi momento durante il processo di raccolta, chiedere il permesso di pungere un altro dito, poi pulire e fasciare il sito di puntura iniziale e ricominciare se la richiesta viene accettata. Per prevenire la coagulazione, continuare la mungitura dito del partecipante di mantenere il sangue che scorre o provare saldamente pulendo la puntura con una garza sterile per interrompere la formazione di coaguli. Nota: I successivi dita bastoni possono essere necessari per alcuni motivi: Una stanza fredda può causare più rapida coagulazione; anche la viscosità del sangue dei partecipanti non può essere l'ideale, o poveri tecniche di mungitura può anche avere un impatto il flusso di sangue. Scaldamani, o acqua corrente calda, utilizzata prima punctura può invertire l'effetto di una cella frigorifera. Una volta che i DBS sono stati raccolti, o se il partecipante non vuole successive dita bastoni, pulire il sito di puntura di un sangue estraneo. Bendare il sito di puntura per evitare la contaminazione potenziale una volta che il partecipante lascia l'area di raccolta del campione. Controllo di qualità FI (QC) di valutazione: Dopo aver completato la raccolta di campioni, di valutare i campioni di qualità. Assicurarsi macchie sono 1) almeno 0,375 in diametro misurato dalla parte posteriore della zona di raccolta; 2) adeguatamente bagnati carta di raccolta in modo da essere di dimensioni simili su entrambi i lati della carta filtro, macchie non soddisfano questo criterio indicano raccolta tramite contatto del dito di carta di raccolta e probabilmente sbavature; 3) non in contatto tra loro (aree di macchie sovrapposte non sono assayable). Completano la raccolta del campione Dopo guidelines descritti nella fase 1.1, dispongono di tutte le rimanenti materiali di raccolta contaminati, compresi tutti gli elementi che possono essere state a contatto con materiali potenzialmente infettivi. Stare la carta raccolta su un underpad protettiva ad asciugare. Spazio le schede di raccolta per consentire un buon flusso d'aria tra di loro. Il tempo minimo di aria secca è 15 min, preferibilmente almeno 30 min. Per consentire la massima portata d'aria, è importante piegare il retro della carta raccolta in modo che possa stare liberamente e fornire un flusso d'aria dietro i campioni sulla carta di raccolta. Con tutte le fasi, rimuovere PPE. Risposta ad un sentimento argomento debole o non ben Sebbene sia improbabile, un partecipante può diventare vertigini, stordimento, o svenimento durante o dopo il bastone dito. Essere attenti a segni quali pallore, sudorazione sul viso e sulla fronte, le denunce di offuscamento della vista, cadenti o svolazzanti palpebre, o denunce di nausea. L'insorgenza di tI sintomi ueste è spesso improvviso, collezionisti del campione devono essere pronti a rispondere rapidamente se uno dei sintomi sono visibili. Se uno qualsiasi di questi sintomi sono presenti in qualsiasi momento durante la procedura, reagire secondo le seguenti procedure. Se un partecipante si sente debole, capogiri, vertigini, o mostra segni di svenimento, intraprendere le seguenti azioni: Interrompere la procedura. Fate attenzione che il partecipante non cada o diventare feriti. Tranquillamente rassicurare il partecipante e, se necessario, chiedere al partecipante di piegare in vita e mettere il suo / la sua testa tra le / le sue gambe. Se la mobilità è limitata e il partecipante può essere spostato, in posizione adiacente imbottito può essere utilizzato per riposare. Avere il resto partecipante per 10 min. Riprendere la procedura se i consensi dei partecipanti a continuare. Se un partecipante sviene, intraprendere le seguenti azioni: Interrompere la procedura. Fare attenzione cheil partecipante non cade o diventare feriti. Avere la menzogna partecipante sul suo / la schiena il più rapidamente possibile con i piedi elevati. Il partecipante sarà incaricato di sdraiarsi direttamente dalla posizione seduta, senza piedi. Chiedere al partecipante per allentare gli abiti stretti. Avere il resto partecipante per 10 min. Raccolta macchia di sangue non deve continuare. Se il partecipante non risponde dopo 1 min, chiamare il 911. Abbattere l'area laboratorio: Una volta che la raccolta di macchie di sangue è stato completato, l'area di raccolta deve essere spezzato e la zona decontaminata per accertarsi che passanti non verrà infettato da BBP. L'area di raccolta del sangue, i contenitori attrezzature, materiali di raccolta e contenitori di rifiuti deve essere pulito di BBP. Come sempre, indossare PPE durante la manipolazione di materiali potenzialmente infettivi. Rimuovere dalla zona di raccolta erepack tutti i materiali non contaminati. Smaltire qualsiasi residuo materiale di scarto contaminati nella canna rifiuti biologici. Chiudere l'apposito contenitore e riporlo in una zona che offre una protezione dalla contaminazione. Se il contenitore taglienti è di 3/4, opportunamente smaltirlo e sostituirlo con un nuovo contenitore taglienti. Pulire l'intera area di raccolta del campione con virucidi salviettine disinfettanti microbiche. Una volta che tutto il materiale a rischio biologico è stato eliminato, il sacchetto può essere sterilizzato. Durante la rimozione del sacchetto dalla canna rifiuti, essere prudenti a toccare solo la parte esterna del sacchetto e per sigillare ermeticamente il sacchetto. E 'anche buona norma usare microbica virucida salviette per pulire l'esterno di tutte le attrezzature per evitare la contaminazione incrociata. 4. Formazione per la raccolta DBS Verificare ogni collezionista macchia di sangue secco è certificata da una persona qualificata prima di eseguire la proceduraDure a pazienti o soggetti di ricerca. Assicurarsi che i collezionisti dimostrano il rispetto per i partecipanti, la fiducia e la competenza nell'uso dei DPI e delle forniture di raccolta del sangue, nella raccolta di macchie di volume sufficiente, e nel completare la procedura in modo tempestivo ed efficiente, idealmente in meno di 10 min. 5. Esempio di Packaging e conservazione Assicurarsi che i campioni DBS si sono asciugati per almeno 15 minuti prima di essere insaccato per l'archiviazione, una carta saturo può richiedere 30 minuti o più per adeguatamente asciutto. Chiudere il coperchio della scheda di raccolta, garantendo il campione è completamente asciutta per evitare sbavature e contaminare il campione. Prendere un sacchetto esemplare di rischio biologico e posizionare un sacchetto di essiccante nel sacchetto del campione. Porre il campione DBS all'interno del sacchetto campione. Indossare sempre guanti quando si maneggiano i campioni DBS. Evitare che i campioni di sangue di toccare l'esterno del sacchetto campione. Collocare ogni campione in proprio ingegno sacchetto di campionamento di rischio biologicoha essiccante pacchetto. Appiattire il sacchetto per rimuovere l'aria in eccesso e quindi sigillare il sacchetto ermeticamente. Porre il campione insaccato in un dispositivo di raffreddamento di stoccaggio per il trasporto o la conservazione temporanea. Evitare temperature elevate. Congelare o dosaggio campioni DBS entro due settimane dalla raccolta, come i campioni DBS possono essere tipicamente conservati a temperatura ambiente per due settimane senza degrado significativo a seconda dell'analita 7,2. 6. Trasporti Campione e spedizione A meno noti per contenere agenti infettivi, nave secca campioni blood spot come esenti campioni umani di età inferiore Dipartimento di regolamenti Trasporti Uniti e in conformità della parte 2, capitolo 6, § 6.3.2.3.6 della Organizzazione Internazionale dell'Aviazione Civile (ICAO) Istruzioni Tecniche 8 . Se congelato, i campioni della nave durante la notte in ghiaccio secco con le precauzioni supplementari necessarie per le sostanze pericolose, o con gelpaks congelati a -80 ° C. Nave il Lunedi, Mercoledìper evitare di disgelo in transito a causa di ritardi o fine settimana / feste, con la conferma dal sito ricevente che si aspettano e pronto a ricevere e congelare i campioni. 7. Controllo di qualità Assessment Dopo il prelievo e prima del dosaggio (preferibilmente prima del congelamento al fine di minimizzare il numero di cicli di congelamento-scongelamento) valutare campioni per qualità. Includere i seguenti criteri di valutazione della qualità del campione, l'imballaggio adeguato, essiccante color-coded rimasta intatta (a secco), la saturazione di macchie, le dimensioni delle macchie, metodi di raccolta adeguati tra cui macchie non si sovrappongono o spalmato su carta che indicano contatto con un dito soggetto. 8. Freezer bagagli Anche se i tempi di degradazione differiscono di analiti, congelare i campioni DBS entro due settimane di raccolta per i migliori risultati. Congelare i campioni con essiccante in un freezer laboratorio-grade. Come con qualsiasi campione biologico, ridurre al minimo gelo-disgelo cycles, anche se alcuni test in campioni DBS hanno mostrato alcuna evidenza di degradazione fino a sei cicli di gelo-disgelo 9-11.

Representative Results

Figura 1. Secchi campione di macchia di sangue. Carta raccolta viene mostrato con quattro, validi punti raccolti nel processo di essiccazione. Clicca qui per vedere l'immagine ingrandita. Sono mostrati Figura 2. Buone e cattive secchi campioni blood spot. Risultati di successo (a destra) e fallimentare (a sinistra) raccolta DBS. Clicca qui per ingrandire imetà. Figura 3. Atteggiamenti e pratiche associate con il rischio di malattia dipendente cardiometabolic 6 Managers '. Questa cifra è stata modificata dal Berkman, LF, Buxton, OM, Ertel, K. & Okechukwu, le pratiche di C. agenzia legate al lavoro-famiglia equilibrio prevedere cardiovascolare dipendente il rischio e la durata del sonno nelle impostazioni di cura estese. Journal of Occupational Health Psychology 115, 316-329 (2010). Lavoratori esposti ai dirigenti con i punteggi lavoro-famiglia media o bassa di apertura e creatività per aiutare con il lavoro dei loro dipendenti e la necessità della famiglia, hanno statisticamente significativo aumento delle probabilità di avere due o più rischi cardiovascolari (fumatore, obesità, alta pressione sanguigna o campagna pubblicitariartension, colesterolo alto e alto di emoglobina glicosilata (HbA1c) o la diagnosi di diabete). Superiore e pannelli centrali rappresentano valori medi ± deviazioni standard per il colesterolo totale valutata dalla macchia di sangue secco e Hb A1C valutati da punto di dispositivo di assistenza (che può anche essere determinato in modo attendibile da macchie di sangue essiccato). Pannello inferiore mostra il rischio di malattia cardiovascolare in base al punteggio manager. Analisi limitato a infermieri e altri dipendenti che prestano assistenza diretta indicano che l'esposizione ai dirigenti con bassa creatività e apertura relativi problemi di lavoro e famiglia può essere particolarmente importante per questi individui (OR per basso punteggio WF = 6.4, p = 0,01). Tutti i modelli di controllo per età, sesso, salario, istruzione, razza / etnia, e cantiere. Clicca qui per vedere l'immagine ingrandita.

Discussion

Biomarcatori sono strumenti estremamente utili in più discipline, tra cui medicina, biologia cellulare, genetica, psicologia, sociologia, demografia, epidemiologia e sociale. All'interno di ogni disciplina, la validità e l'affidabilità fase iniziale di ricerca di biomarcatore è stato usato per scoprire sia il rischio di malattia nascosta e fornire la previsione longitudinale degli esiti di salute. In questi casi, i biomarcatori che sono precisi, durevoli (cioè possono sopravvivere al ritardo tra raccolta e l'attuazione del test di laboratorio del campione di estrarre il biomarker) e versatile (cioè utile in una varietà di modelli) sono obbligatori.

Mentre la raccolta DBS è una procedura relativamente semplice, diverse tecniche possono aiutare a massimizzare il volume di macchie raccolte. Comincia prima raccolta, garantendo la mano di una partecipante è caldo, e quindi che i vasi sanguigni si dilatano, aiuterà il flusso di sangue una volta il dito è forata. Utilizzando scaldamani o avere unpartecipante eseguire le loro mani sotto l'acqua calda può aiutare con questo processo. Mungitura il dito prima collezione sarà tirare il sangue alla punta delle dita e scaldare la mano per aiutare il flusso di sangue. La mungitura è un processo che migliora con la pratica. Collezionisti dovrebbero usare qualsiasi tecnica che trovano più comodo ed efficace, ma l'approccio più comune prevede la mungitura mano del partecipante con la mano opposta del collezionista. Questo metodo consente il pollice del collettore di lavorare in profondità nel palmo del partecipante mentre il lato opposto può stabilizzare polso del partecipante. Come esempio, se si dovesse raccolta di sangue di un dito della mano sinistra del partecipante, il collettore stabilizzerebbe polso del partecipante con la mano sinistra e latte con la mano destra. Gli errori più comuni commessi durante la mungitura non includere utilizzando una presa salda, tirando la pelle sopra la mano piuttosto lavorare nei muscoli per tirare il sangue verso la punta del dito. E 'anche importante evitare pinching il dito con la mano mungitura o strettamente presa polso del partecipante con la mano nonmilking, entrambi i quali impediscono il flusso di sangue.

Quando la puntura del dito, fare la puntura il più profondamente possibile, premendo con forza la lancetta nel dito prima dello scarico. Una puntura superficiale risulta meno flusso sanguigno e veloce coagulazione. Dopo la puntura del dito, lavorando rapidamente è fondamentale. Sangue sottile porta alla facile raccolta e macchie più grandi. Dopo puntura, il sangue diventa più viscoso fino coagulazione. Meno tempo richiesto per raccogliere le gocce di sangue sulla carta maggiore il loro volume.

Idealmente il sangue del partecipante sarà abbastanza sottile che scende cadrà del proprio peso, ma questo non sarà il caso per tutti i partecipanti, come il sangue di alcune persone è più spessa o coaguli più velocemente di altri. Se il sangue è troppo spesso a cadere dal dito, la carta filtro deve essere portato al sangue per la raccolta. When portando la scheda al sangue è importante tenere la carta a contatto con la goccia mentre è appeso dal dito a lungo possibile, non solo tamponando il sangue alla scheda. Ciò contribuirà sangue estraibile dal dito di massimizzare la dimensione del punto. Questa tecnica richiede mano ferma, per mantenere il contatto tra il sangue e la scheda. Con entrambe le mani, una per stabilizzare la mano partecipanti e uno per tenere la scheda, e mantenendo entrambe le mani a contatto uno con l'altro aiuta a stabilizzare la carta e il sangue insieme.

Aree di ricerca avanzate, quali la valutazione del rischio cardiometabolico, hanno a lungo invocato biomarcatori come la proteina C-reattiva (CRP), l'insulina, e l'emoglobina glicosilata (HbA1C) per la diagnosi precoce del rischio e gli sforzi di prevenzione, così come biomarcatori di "endpoint duri" per la malattia cardiovascolare (CVD) del rischio e mortalità cardiovascolare associata 12. Epidemiologia clinica valuta frequentemente biomarcatori per prospectively predire gli esiti di rischio cardiometabolico come le malattie cardiache e il diabete di tipo II. Forse il più usato di tutti i biomarcatori è il punteggio di rischio Framingham, un composito che include la pressione sanguigna, livelli di colesterolo HDL e livelli totali di colesterolo che ha dimostrato l'utilità nel predire CVD 13. Tuttavia, il punteggio di Framingham ha sperimentato alcune controversie tecniche, e ha dei limiti in studi incentrati sul collegamento tra fattori sociali e ambientali per la salute, suggerendo la necessità di biomarcatori più precisi e specifici relativi alla ricerca cardiovascolare.

Ci sono un certo numero di kit disponibili in commercio utilizzando ELISA o tecniche simili disponibili per l'analisi di campioni DBS. Necessarie per il dosaggio di campioni DBS sono l'uso di specifici e ottimizzati passi eluizione di portare i campioni essiccati in soluzione 2. Si tratta di una zona in espansione della ricerca come test per più analiti sono attualmente in fase di sviluppo 1. Tra the saggi già validati e ampiamente utilizzati sono il colesterolo 2, CRP 10,14,15, IgE16, EBV 9,15, la leptina 17, e cyotkines 18. Ci sono un certo numero di laboratori specializzati nel saggio di DBS, tra cui l'Università di Washington, Dipartimento di Medicina di Laboratorio (UW Lab Med) Biomarker Laboratory (Direttore: Marco Wener).

Tenendo presente che un pannello di biomarcatori, piuttosto che un biomarker lone, è più utile nel campo della ricerca cardiovascolare e diabete, biomarker devono essere considerati insieme a una varietà di fattori contestuali al fine di massimizzare la loro utilità. Ricerca di biomarcatori può essere costoso tuttavia, sia finanziariamente e in tempo per la raccolta dei dati. Così, mentre è di vitale importanza scegliere biomarcatori che siano accurati, resistente e versatile, il lavoro e la famiglia di ricerca biomarcatore deve essere radicato in praticità selezionando biomarcatori che sono poco costosi, appropriato e può essere raccolto rapidamente with facilità. Inoltre, considerazioni pratiche spesso sfociano in una incapacità di massimizzare contemporaneamente il prezzo, la qualità e la velocità all'interno di una procedura. Qui si trovano le prossime fasi della ricerca di biomarker della salute all'interno di studi sul campo e della popolazione. Il campo di ricerca biomarker è attualmente in un periodo di crescita drammatica, tuttavia, la maggior parte del lavoro deve ancora venire.

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Questo lavoro è stato supportato dal lavoro, famiglia e Health Network (www.WorkFamilyHealthNetwork.org), che è finanziato da un accordo di cooperazione con il National Institutes of Health e il Centers for Disease Control and Prevention: Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health e lo Sviluppo Umano (Grant # U01HD051217, U01HD051218, U01HD051256, U01HD051276), National Institute on Aging (Grant # U01AG027669), Office of Behavioral Sciences Research and Science, il National Heart, Lung and Blood Institute (R01HL107240) e Istituto Nazionale per la sicurezza e la salute (Grant # U01OH008788, U01HD059773). Le sovvenzioni da parte di William T. sovvenzione della Fondazione, Alfred P Sloan Foundation, e l'Amministrazione per bambini e famiglie hanno fornito ulteriori finanziamenti. I contenuti di questa pubblicazione sono di esclusiva responsabilità degli autori e non necessariamente rappresentano le opinioni ufficiali di questi istituti e uffici.

Materials

Asepti II Microbial Wipes EcoLab D12330345 3rd party shipping
Bio-hazard waste bags VWR 14220-092 High Strength Autoclavable Polypropylene Biohazard Bags, 2 mil
Bio-hazard waste barrel Tyco 58578-092 8g. Slide lid
Sharps Container BD Medical BD305487 1.4 qt.
Chux VWR 82020-845 Absorbent bench underpads 
Gloves VWR XSmall: 89038-267 Powder-free, latex-free nitrile gloves
Small: 89038-268
Medium: 89038-270
Large: 89038-272
XLarge: 89038-274
Hand sanitizer (e.g., Purell) Johnson & Johnson 89040-210 3rd party shipping
Alcohol wipes WEBCOL and CURITY 82003-856 Prep pads
Gauze VERSALON 82004-826 Non-woven sponges
Band-Aids Nutramax Stat Strips 15431-475
Lancets Owen Mumford 82028-060 3.0 mm, 21 ga. 
Protein paper collection cards Whatman Custom-build 903 Protein Saver Collection paper
Desiccant VWR 61161-319 Humidity sponges
Specimen bags Lab Guard Reclosable Biohazard Bags, ITW Minigrip 56766-370 6” x 9”
Specimen storage cooler Igloo Playmate Mini 4 qt.; direct from manufacturer

References

  1. McDade, T. W., Williams, S., Snodgrass, J. J. What a drop can do: dried blood spots as a minimally invasive method for integrating biomarkers into population-based research. Demography. 44, 899-925 (2007).
  2. Kirschbaum, C., Read, G. F., Hellhammer, D. H. . Assessment of hormone and drugs in saliva in biobehavioral research. , (1992).
  3. Piazza, J. R., Almeida, D. M., Dmitrieva, N. O., Klein, L. C. Frontiers in the use of biomarkers of health in research on stress and aging. J. Gerontol. Series B Psychol. Sci. Soc. Sci. 65, 513-525 (2010).
  4. Smyth, J. M. Individual differences in the diurnal cycle of cortisol. Psychoneuroendocrinology. 22, 89-105 (1997).
  5. Berkman, L. F., Buxton, O. M., Ertel, K., Okechukwu, C. Manager’s practices related to work-family balance predict employee cardiovascular risk and sleep duration in extended care settings. J. Occup. Health Psychol. 115, 316-329 (2010).
  6. Buxton, O. M., Malarick, K., Wang, W., Seeman, T. Changes in dried blood spot Hb A1c with varied postcollection conditions. Clin. Chem. 55, 1034-1036 (2009).
  7. . International Civil Aviation Organization.. Technical Instructions for the Safe Transport of Dangerous Goods by Air. , (2010).
  8. McDade, T. W. Epstein-Barr virus antibodies in whole blood spots: a minimally invasive method for assessing an aspect of cell-mediated immunity. Psychosom. Med. 62, 560-567 (2000).
  9. McDade, T. W., Burhop, J., Dohnal, J. High-sensitivity enzyme immunoassay for C-reactive protein in dried blood spots. Clin. Chem. 50, 652-654 (2004).
  10. McDade, T. W., Shell-Duncan, B. Whole blood collected on filter paper provides a minimally invasive method for assessing human transferrin receptor level. J. Nutr. 132, 3760-3763 (2002).
  11. Gerszten, R. E., Wang, T. J. The search for new cardiovascular biomarkers. Nature. 451, 949-952 (2008).
  12. D’Agostino, R. B., Grundy, S., Sullivan, L. M., Wilson, P. Validation of the Framingham coronary heart disease prediction scores: results of a multiple ethnic groups investigation. J. Am. Med. Assoc. 286, 180-187 (2001).
  13. McDade, T. W., Rutehrford, J., Adair, L., Kuzawa, C. W. Early origins of inflammation: microbial exposures in infancy predict lower levels of C-reactive protein in adulthood. Proc. R Soc. B.. , (2009).
  14. McDade, T. W., Ice, G. H., James, G. D. . Measuring Stress in Humans. A Practical Guide for the Field. , 181-207 (2007).
  15. Tanner, S., McDade, T. W. Enzyme immunoassay for total immunoglobulin E in dried blood spots. Am. J. Hum. Biol. 19, 440-442 (2007).
  16. Miller, A. A., Sharrock, K. C., McDade, T. W. Measurement of leptin in dried blood spot samples. Am. J. Hum. Biol. 18, 857-860 (2006).
  17. Miller, E. M., McDade, T. W. A highly sensitive immunoassay for interleukin-6 in dried blood spots. Am. J. Hum. Biol. , (2012).

Play Video

Cite This Article
Ostler, M. W., Porter, J. H., Buxton, O. M. Dried Blood Spot Collection of Health Biomarkers to Maximize Participation in Population Studies. J. Vis. Exp. (83), e50973, doi:10.3791/50973 (2014).

View Video