Summary

Medição da alodinia táctil em um modelo murino de prostatite bacteriana

Published: January 16, 2013
doi:

Summary

Infecção da próstata pode ser um fator que contribui na mediação dor pélvica na prostatite crônica. Descreve-se o processo para a preparação do inoculo bacteriano padronizado, a instilação de bactérias para dentro da uretra de ratos machos e metodologia para medir a alodinia táctil em ratos ao longo do tempo.

Abstract

Escherichia coli uropatogênica (UPEC) são patógenos que desempenham um papel importante em infecções do trato urinário e prostatite bacteriana 1. Temos mostrado recentemente que UPEC têm um papel importante na iniciação da dor pélvica crônica 2, uma característica de prostatite crônica / síndrome de dor pélvica crônica (CP / CPPS) 3,4. Infecção da próstata por UPEC clinicamente relevante pode iniciar e estabelecer a dor crónica, através de mecanismos que podem envolver danos nos tecidos e a abertura dos mecanismos de auto-imunidade 5.

Um desafio para a compreensão da patogénese de UPEC na próstata é a relativa inacessibilidade da glândula da próstata a manipulação. Utilizamos um método previamente descrito infecção intra-uretral 6 para proporcionar uma estirpe clínica de UPEC em ratinhos macho estabelecendo assim uma infecção ascendente da próstata. Aqui, descrevemos nossos protocolos para padronizar a bacterial inoculo 7, bem como o procedimento para a cateterização anestesiados ratos machos por instilação de bactéria.

CP / CPPS é essencialmente caracterizada pela presença de alodinia táctil 4. Testes de comportamento foi baseada no conceito de hiperalgesia cutânea resultante referidas 8-10 dores viscerais. Um foco irritável em tecidos viscerais reduz o limiar da dor cutâneas permitindo uma resposta exagerada a normalmente não estímulos dolorosos (alodinia). Aplicação de uma força normal para a pele, em resultado respostas anormais que tendem a aumentar com a intensidade da dor visceral subjacente. Descrevemos metodologia em NOD / ShiLtJ ratos que utilizam fibras de von Frey para quantificar alodinia táctil ao longo do tempo em resposta a uma única infecção com bactérias UPEC.

Protocol

1. Bactérias Preparação para inoculação em camundongos A seguir, deve ser feita sob condições assépticas. Tome um 17 x 100 milímetros tubos de polipropileno com tampas e adicionar 3 ml de caldo de Luria frescas (LB) de mídia. Utilizando pontas autoclavadas, levará algum estoque de glicerol congelado da estirpe de bactérias CP1 2 e transferir uma pequena quantidade da cultura para o tubo contendo os meios LB. Substituir a tampa do tubo de modo a que o oxigén…

Representative Results

Examinámos NOD / ShiLtj e C57BL/6J ratinhos macho para a presença de dor crónica após infecção bacteriana. Ratos machos (5-7 semanas de idade) foram instilados com solução salina ou de bactérias no interior da uretra (Figura 1). Estimulação mecânica da área pélvica com filamentos de von Frey de camundongos C57BL/6J instilados com solução salina e ratinhos C57BL/6J UPEC infectados resultou numa resposta de frequência que não se alterou durante o curso de 28 dias da experiência <s…

Discussion

Infecção da próstata do rato com UPEC permite a modelagem em vivo de eventos que podem estar envolvidos na patogénese da prostatite bacteriana, CP / CPPS ou como um evento de predisposição em inflamação crónica. Os métodos descritos para a preparação bacteriana e empate instilação em cima de um grande corpo de literatura sobre modelos UPEC em infecção do trato urinário feminino 7,14. O modelo tem grande aplicabilidade para o estudo da patogênese, testando vacinas candidatas potencia…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Esta pesquisa foi apoiada pela concessão 1K01DK079019A2 (PT) do NIH / NIDDK.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number
Culture tubes BD Falcon 352059
LB Broth Miller EMD EM1.10285.0500
Nalgene Centrifuge Tubes Thermo 3118-0050
Isoflurane Butler Schein NDC 11695-6776-1
Catheter needle 30G Hamilton 91030
PE10 tubing BD intramedic 427400
Von Frey Filaments Stoelting 58025-31

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Cite This Article
Quick, M. L., Done, J. D., Thumbikat, P. Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis. J. Vis. Exp. (71), e50158, doi:10.3791/50158 (2013).

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