Summary

האפקט סינרגיסטי של אור וgentamycin הגלויים על<em> Aeruginosa Pseudomona</em> מיקרואורגניזמים

Published: July 02, 2013
doi:

Summary

אנו מראים כי מכשיר ביו מעורב פיתחה טיפול לייזר מבוסס גלוי רציף או פעם שהוא בשילוב עם טיפול אנטיביוטי (gentamycin), גורם לאפקט סינרגיסטי מובהק סטטיסטי שמוביל לירידה בכדאיות של<em> פ aeruginosa</em> PAO1, על ידי 8 יומן בהשוואה לטיפול באנטיביוטיקה לבד.

Abstract

לאחרונה היו כמה פרסומים על השפעת bactericidal של אור הנראה, רובם בטענה כי חלק כחול של הספקטרום (400 nm-500 ננומטר) הוא אחראי להרג פתוגנים שונים 1-5. השפעת phototoxic של אור הכחול הוצעה להיות תוצאה של מיני חמצן תגובתי המושרה אור (ROS) על ידי היווצרות פוטוסנסיטייזרים חיידקים אנדוגניים אשר רובם לקלוט אור באזור הכחול 4,6,7. ישנם גם דיווחים על השפעת biocidal של אדום וליד אינפרא אדום 8, כמו גם אור ירוק 9.

במחקר הנוכחי, שפתחנו שיטה שאפשרה לנו לאפיין את ההשפעה של מתח גבוה ירוק (אורך גל של 532 ננומטר) אור Q-Switched רציף (CW) ופעם (QS) בPseudomonas aeruginosa. שימוש בשיטה זו אנחנו גם בחנו את ההשפעה של אור הירוק בשילוב עם טיפול אנטיביוטי (gentamycin) על כדאיות החיידקים. פ aeruginosa הוא acהפתוגן האופורטוניסטי noscomial ommon גורם למחלות שונות. הזן הוא די עמיד לאנטיביוטיקה שונות ומכיל רבים מסוג Mex חזה AcrB / RND multidrug מערכות זרימה 10.

השיטה מנוצל חיידקים נטולי חיים נייחים שלב גראם שליליים (עמ 'זן aeruginosa PAO1), גדלו במרק לוריא (LB) בינונית חשוף לQ-Switched ו / או CW לייזרים עם ובלי התוספת של gentamycin האנטיביוטי. כדאיות תא נקבעו בנקודות זמן שונות. התוצאות שהתקבלו הראו כי טיפול לייזר לבד לא להפחית כדאיות תא בהשוואה לשליטת מטופל וכי טיפול gentamycin לבד רק הביאה לירידה של 0.5 לוג בספירה המעשית עבור פ aeruginosa. לייזר המשולב וטיפול gentamycin, לעומת זאת, הביאו לאפקט סינרגיסטי ואת הכדאיות של פ aeruginosa הופחת ב 8 היומן של.

השיטה המוצעת יכולה להיות עוד יותר impleעינה באמצעות פיתוח של צנתר כמו מכשיר שמסוגל הזרקת תמיסת אנטיביוטיקה לתוך האיבר הנגוע בזמן מאיר את האזור באור בו זמנית.

Protocol

1. תרבות חיידקים פ גראם שלילי aeruginosa זן PAO1 גדלו במרק לוריא (LB) על 37 מעלות צלזיוס למשך 18 שעות. התרבות של תאים הייתה אז centrifuged ב 7,500 סל"ד (סיבובים לדקה) במשך 5 דקות וsupernatant הוסר. <li style=";t…

Representative Results

ההתקנה מבוססת לייזר מוצגת סכמטי באיור 1. תנאי הניסוי הראשון מנוצלים Nd CW: YAG לייזר בעל אורך גל של 532 ננומטר (ההרמוני שני של Nd: YAG) וכוח אופטי ממוצע של 200 מגה ואט. קרן זו פוצלה לשני נתיבים אופטיים באמצעות 50% 50% מפצל אופטי כך שכל קורה לי פיצול כוח של 100 מגה ואט אלומה /. קו…

Discussion

פוטותרפיה כבר תחום מחקר רב תחומי מתקדם בשנים האחרונות מתפתחות כגישה מבטיחה לטיפול במחלות רבות. בהקשר זה את השימוש באור בטווח הגלוי, נחקר בהרחבה. כך, למשל, נמצא כי ניתן לרפא פצעים מזוהמים בצורה יעילה יותר על ידי חשיפתם לאור הנראה אינטנסיבי למטרות עיקור. מנגנון הפעולה ל…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
Lauria Broth Difco 241420
Gentamycin Sigma G1914
Bacto Agar Difco 231710

References

  1. Feuerstein, O., Persman, N., Weiss, E. I. Phototoxic Effect of Visible Light on Porphyromonas gingivalis and Fusobacterium nucleatum: An In Vitro Study. Photochemistry and Photobiology. 80, 412-415 (2004).
  2. Enwemeka, C. S., Williams, D., Enwemeka, S. K., Hollosi, S., Yens, D. Blue 470-nm light kills methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in vitro. Photomed. Laser Surg. 27, 221-226 (2009).
  3. Guffey, J. S., Wilborn, J. In vitro bactericidal effects of 405-nm and 470-nm. Photomed. Laser Surg. 24, 684-688 (2006).
  4. Lipovsky, A., Nitzan, Y., Friedman, H., Lubart, R. Sensitivity of Staphylococcus aureus strains to broadband visible light. Photochem. Photobiol. 85, 255-260 (2008).
  5. Lipovsky, A., Nitzan, Y., Lubart, R. A possible Mechanism for visible light induced wound healing. Lasers in Surgery and Medicine. 40, 509-514 (2008).
  6. Lipovsky, A., Nitzan, Y., Gedanken, A., Lubart, R. Visible light-induced killing of bacteria as a function of wavelength: Implication for wound healing. Lasers in Surgery and Medicine. 42, 467-472 (2010).
  7. Feuerstein, O., Ginsburg, I., Dayan, E., Veler, D., Weiss, E. Mechanism of Visible Light Phototoxicity on Porphyromonas gingiwalis and Fusobacferium nucleaturn. Photochemistry and Photobiology. 81, 1186-1189 (2005).
  8. Nussbaum, E. L., Lilge, L., Mazzulli, T. Effects of 630-, 660-, 810-, and 905-nm laser irradiation delivering radiant exposure of 1-50 J/cm2 on three species of bacteria in vitro. J. Clin. Laser Med. Surg. 20, 325-333 (2002).
  9. Dadras, S., Mohajerani, E., Eftekhar, F., Hosseini, M. Different Photoresponses of Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa to 514, 532, and 633 nm Low Level Lasers In Vitro. Current Microbiology. 53, 282-286 (2006).
  10. Stover, C. K., Pham, X. Q., Erwin, A. L. Complete genome sequence of Pseudomonas aeruginosa PAO1, an opportunistic pathogen. Nature. 406, 952-964 (2000).
  11. Hamblin, M. R., Demidova, T. N. Mechanisms of low level light therapy. Proc. SPIE. 6140, 1-12 (2006).
  12. Krespi, Y. P., Stoodley, P., Hall-Stoodley, L. Laser disruption of biofilm. Laryngoscope. 118, 1168-1173 (2008).
  13. Reznick, Y., Banin, E., Lipovsky, A., Lubart, R., Zalevsky, Z. Direct laser light enhancement of susceptibility of bacteria to gentamycin antibiotic. Opt. Commun. 284, 5501-5507 (2011).

Play Video

Cite This Article
Reznick, Y., Banin, E., Lipovsky, A., Lubart, R., Polak, P., Zalevsky, Z. The Synergistic Effect of Visible Light and Gentamycin on Pseudomona aeruginosa Microorganisms. J. Vis. Exp. (77), e4370, doi:10.3791/4370 (2013).

View Video