Måling af antistof Virkninger på cellulær funktion af isolerede cardiomyocytes

Dilateret kardiomyopati (DCM) er en af de vigtigste årsager til hjertesvigt hos yngre voksne ^1. Selv om genetiske disposition og redegørelse for giftige stoffer er kendte årsager til denne sygdom i omkring en tredjedel af patienterne, oprindelsen af ​​DCM er fortsat stort set uklar. I et betydeligt antal af disse patienter har autoantistoffer mod hjerte-epitoper blevet opdaget og er mistænkt for at spille en central rolle i opståen og progression af sygdommen ^2,3. Betydningen af hjerte-autoantistoffer understreges af en hæmodynamisk bedring hos DCM patienter efter eliminering af autoantistoffer ved immunoadsorption ^3-5. En række specifikke antigener er allerede blevet identificeret ^2,3 og antistoffer mod disse mål kan påvises ved immunoassays. Imidlertid kan disse analyser ikke diskriminere mellem stimulere (og derfor funktionelt effektive) og blokere autoantistoffer. Der er stigende evidence, at denne skelnen er afgørende ^6,7. Det kan også antages, at de mål for en række cardiotropic antistoffer er stadig ukendt og kan derfor ikke påvises ved immunoassays. Derfor har vi etableret en fremgangsmåde til påvisning af funktionelt aktive cardiotropic antistoffer, der er uafhængige af deres respektive antigen. Baggrunden for fremgangsmåden er den høje homologi sædvanligvis observeret for funktionelle regioner af kardiale proteiner i mellem pattedyr ^8,9. Dette antyder, at hjerte-antistoffer rettet mod humane antigener vil krydsreagere med ikke-humane målceller, hvilket tillader test af IgG fra DCM patienter på voksne rotter cardiomyocytes. Vores fremgangsmåde består af tre trin: først bliver IgG isoleret fra patientplasma med Sepharose koblet anti-IgG-antistoffer opnået fra immunoadsorption søjler (PlasmaSelect, Teterow, Tyskland). For det andet voksne kardiomyocytter isoleres ved collagenaseperfusion i en Langendorff perfusion apparat under anvendelse af aprotocol modificeret fra tidligere arbejder ^10,11. De opnåede kardiomyocytter er fastgjort til laminin-overtrukne kamre dækglasset og farvet med Fura-2, en calcium-selektivt fluorescerende farvestof, som let kan bringes ind i cellen at observere intracellulært calcium ^{(Ca2 +)} indhold ^12. I det sidste trin, virkningen af patientens IgG på cellens afkortning og ^{Ca2 +-transienter} i felt stimulerede cardiomyocytes overvåges online ved hjælp af et kommercielt myocyt calcium og kontraktilitet overvågningssystem (IonOptix, Milton, MA, USA) forbundet til en standard omvendt fluorescerende mikroskop.