Inductie van Graft-versus-host ziekte en<em> In Vivo</em> T-cel monitoren door gebruik van een MHC-matched muizenmodel
Summary
Murine beenmergtransplantatie is een veel gebruikte techniek om immunologische mechanismen voor graft-versus-host ziekte bij mensen bestuderen. De mogelijkheid om T-cel mensenhandel patronen te volgen<em> In vivo</em> Kunnen gedetailleerde analyse van de ontwikkeling en de voortzetting van T cel responsen tijdens graft-versus-host ziekte.
Abstract
Graft-versus-host disease (GVHD) de beperkende belemmering voor het brede gebruik van beenmergtransplantatie als therapie voor verschillende hematologische tekortkomingen. GVHD wordt veroorzaakt door volwassen alloreactieve T-cellen in het beenmerg transplantaat die worden ingebracht in de ontvanger en schade aan organen gastheer. Echter in muizen T-cellen moeten worden toegevoegd aan het beenmerg inoculum aan GvHD. Hoewel er veel werk verricht om T cel responsen na transplantatie karakteriseren bioluminescent belichtingstechniek is een niet-invasieve methode om T cel handel patronen te meten in vivo.
Na dodelijke bestraling, zijn ontvangende muizen getransplanteerd met beenmerg cellen en splenocyten van donor muizen. T-cel subsets van L2G85.B6 (transgene muizen die constitutief luciferase) zijn in het transplantaat. Door alleen transplanteren bepaalde T-cel subsets, men in staat om specifieke T cel subsets in vivo volgen,en op basis van hun locatie, het ontwikkelen van hypothesen over de rol van specifieke T-cel subsets in het bevorderen van GVHD op verschillende tijdstippen. Op vooraf bepaalde tijdstippen na transplantatie, ontvangende muizen afgebeeld met een Xenogen IVIS CCD camera. De lichtintensiteit kan worden gekwantificeerd met behulp van levende beeld software om een pseudo-kleurenbeeld op basis van foton-intensiteit (rood = hoge intensiteit, violet = lage intensiteit) te genereren.
Tussen 4-7 dagen na de transplantatie, ontvangende muizen beginnen om de klinische symptomen van GVHD vertonen. Cooke et al. 1. Ontwikkelde een scoringssysteem tot ziekteprogressie basis van de ontvangende muizen vacht textuur, integriteit van de huid activiteit, gewichtsverlies, en houding kwantificeren. Muizen worden dagelijks gescoord, en gedood wanneer ze ten dode opgeschreven. Ontvangende muizen worden over het algemeen ten dode opgeschreven 20-30 dagen na de transplantatie.
Muismodellen zijn waardevolle instrumenten voor het bestuderen van de immunologie van GVHD. Selectief transplanteren het bijzonder T-cel subsets al.dieptepunten voor zorgvuldige identificatie van de rollen elke subset speelt. Niet-invasieve volgen van T cel responsen in vivo werkt als een extra waarde murine GVHD modellen.
Protocol
Discussion
Het protocol voor het induceren van GVHD in muizen hier voorgesteld is een klinisch relevant model van murine GVHD. Oorspronkelijk opgericht door Berger et al.. In 1994, de C57Bl / 6 in BALB.B stam combinatie is MHC-afgestemd, met GVHD sterfte gemedieerd door CD4 afhankelijk, CD8 T effectoren 2, zeer vergelijkbaar met de meest voorkomende klinische scenario 3. Het is bekend dat transplantatie CD8 T cellen alleen geen GvHD in dit model, maar de ziekte is aanzienlijk slechter wanneer zowel C…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We zijn dank verschuldigd aan Alice Gaughan en Jiao-Jing Wang waarvan de uitstekende technische ondersteuning, intellectuele inbreng, en morele steun waren instrumentaal in het verplaatsen van deze studies vooruit. Deze studies werden ondersteund door de NIH subsidie AI036532 te GAH.
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 12633-012 | |
| Fetal Calf Serum | Invitrogen | 10439016 | |
| 40 μM Cell Strainer | BD Biosciences | 352340 | |
| CD3e-Biotin | Miltenyi Biotech | 130-093-021 | |
| Anti-Biotin Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-091-147 | |
| CD8a Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-049-401 | Used to deplete CD8 T cells from spleen. |
| CD8a Purification Antibody Cocktail | Miltenyi Biotech | 130-095-236 | Used to purify CD8 T cells from spleen. |
| D-Luciferin | Caliper Life Sciences | 122796 |
References
- Cooke, K. R. An experimental model of idiopathic pneumonia syndrome after bone marrow transplantation: The roles of minor H antigens and endotoxin. Blood. 88, 3230-3239 (1996).
- Berger, M. T cell subsets involved in lethal graft-versus-host disease directed to immunodominant minor histocompatibility antigens. Transplantation. 57, 1095-1102 (1994).
- Nimer, S. D. Selective depletion of CD8+ cells for prevention of graft-versus-host disease after bone marrowtransplantation. A randomized controlled trial. Transplantation. 57, 82-87 (1994).
- Korngold, R., Sprent, J. Surface markers of T cells causing lethal graft-vs-host disease to class I vs class II H-2 differences. Journal of Immunology. 135, 3004-3010 (1985).
- Cao, Y. A. Molecular imaging using labeled donor tissues reveals patterns of engraftment, rejection, and survival in transplantation. Transplantation. 80, 134-139 (2005).
- Asady, R. E. l. TGF-{beta}-dependent CD103 expression by CD8(+) T cells promotes selective destruction of the host intestinal epithelium during graft-versus-host disease. J. Exp. Med. 201, 1647-1657 (2005).
- Larson, R. S., Springer, T. A. Structure and function of leukocyte integrins. Immunol Rev. 114, 181-217 (1990).
- Karecla, P. I. Recognition of E-cadherin on epithelial cells by the mucosal T cell integrin alpha M290 beta 7 (alpha E beta 7). Eur. J. Immunol. 25, 852-856 (1995).
- Cepek, K. L. Adhesion between epithelial cells and T lymphocytes mediated by E-cadherin and the alpha E beta 7 integrin. Nature. 372, 190-193 (1994).
- Malarkannan, S. The molecular and functional characterization of a dominant minor H antigen, H60. J. Immunol. 161, 3501-3509 (1998).
