Summary

マウス肺樹状細胞の分離

Published: November 22, 2011
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Summary

マウス肺樹状細胞の高度に精製された調製物が記載されている。特定の重点は、従来の樹状細胞サブセットの分離に与えられます。

Abstract

肺の樹状細胞(DC)は、侵入病原体の1,2と同様に気道の免疫寛容の回答3の制御でのセンシングにおいて重要な役割を果たします。肺の樹状細胞の少なくとも3つの主要なサブセットは、マウスで記載されている:従来のDC(CDC)4、形質DC(PDC)5とIFN -産生キラーDC(IKDC)6,7。 CDCのサブセットは、肺8で最も顕著なDCのサブセットです。

DCサブセットを識別するために知られている一般的なマーカーは、CD11cは、I型も単球、マクロファージ、好中球およびいくつかのB細胞9上に発現される膜貫通インテグリン(β2)です。一部の組織では、マウスDCを識別するマーカーとして樹状細胞を使用すると、ほとんどのCD11c +細胞は主要組織適合遺伝子複合体クラスII(MHC – II)の高レベルを表すCDCのサブセットを表す脾臓、のように、有効です。しかし、肺はものより異質な組織であるサイドDCサブセットは、MHC – IIの低レベルの試合CD11cは高レベルの表現の異なる細胞集団の割合が高いがあります。その特性上、ほとんどがF4/80、脾臓マクロファージのマーカーのその式に基づいて、CD11cはハイ MHC – II LOの肺の細胞集団は、潜在的なDC前駆11として、肺のマクロファージ、最近10として同定されている。

マウスPDCには対照的に、肺の免疫応答におけるCDCの特定の役割の研究は、これらの細胞の分離に役立つ可能性が特異的なマーカーの不足により制限されている。したがって、この作品では、我々は高度に精製されたマウスの肺CDCを分離する手順を説明します。肺DCサブセットの分離は、呼吸器病原体だけでなく、肺の宿主免疫応答を誘発する環境要因に応答してこれらの細胞の機能に関する洞察を得るために非常に便利なツールを表します。

Protocol

1。肺血流と、単一の細胞懸濁液大腿静脈を経由してケタミン/キシラジン麻酔の混合物(1mg /マウスケタミン1.8では、キシラジン0.19)と放血の腹腔内注射したマウスを安楽死させるカットと軽く腹膜の外側の皮を引き戻すことによって胸腔を公開。心臓と肺の両方を公開するために、胸郭を切断してダイアフラムを開くに進みます。 EDTA – HBSS(カルシウム/マグネシウム?…

Discussion

肺マウスDCの分離は、呼吸器の刺激の広い範囲の研究のための重要なテクニックです。これらの細胞を得る工程は、細胞の喪失だけでなく、細胞の生存と純度を防ぐための重要な手順が含まれています。コレクションの前に肺を灌流しても、末梢細胞を排除するだけでなく、汚染物質の赤血球を削減することができます。肺の多数が処理されるときに自動化された解離の使用はadvanteogusことが…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

著者らは、顕微鏡との彼の援助のための細胞選別とピーターモットラムと彼女の助けのためにLSUのフローサイトメトリーコアファシリティーでマリリンディートリッヒに感謝したいと思います。この作品は、フライトアテンダント医学研究所、LSU -競争的研究プログラム賞、およびNIH / NIAID助成金P20 RR020159とR03AI081171によって資金を供給された。

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
ACK lysing buffer Invitrogen D6-0005DG  
Anti-mouse CD11c (HL3) BD Pharmingen 5580979 PE-Cy7 conjugated
Anti-mouse I-A/I-E (269) BD-Pharmingen 553623 FITC conjugated
Collangenase Type 1A Sigma 9891-500MG  
Cell strainers BD Falcon 352340, 352360  
CD11c (N418) Microbeads Miltenyi 130-052-001  
DNase I Sigma D5025-150KU  
Hank’s Balanced Salt solution Invitrogen 14170  
Hepes buffer solution Invitrogen 15630  
Petri dishes 60 mm BD Falcon 351016  
GentleMACS™ C tubes Miltenyi 130-093-237  
Gentle MACS dissociator Miltentyi 130-093-235  
AutoMACS-Pro™ Miltenyi 130-092-545  
FASCS Aria BD    

References

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Cite This Article
Lancelin, W., Guerrero-Plata, A. Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells. J. Vis. Exp. (57), e3563, doi:10.3791/3563 (2011).

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