Summary

Leishmaniose cutânea na pele do dorso de Hamsters: um modelo útil para o rastreamento de drogas leishmanicidas

Published: April 21, 2012
doi:

Summary

Otimização do modelo de hamster experimental da leishmaniose cutânea por injeção intradérmica de<em> Leishmania</em> Promastigotas na pele dorsal. Esta abordagem é útil durante a inoculação, seguimento caracterização, de lesões, a aplicação dos tratamentos e obtenção de amostras clínicas. Busca de locomoção, por comida e água, atividades lúdicas e sociais serão preservados.

Abstract

Tradicionalmente, os hamsters são experimentalmente inoculados no focinho ou a pata. No entanto, esses sites não uma úlcera sempre ocorre, a medição do tamanho da lesão é um procedimento difícil e animais apresentam dificuldade para comer, respirar e se mover por causa da lesão. A fim de optimizar o modelo de hamster para a leishmaniose cutânea, macho adulto jovem e fêmeas hamsters dourados (Mesocricetus auratus) foram injectados por via intradérmica na pele dorsal com 1 a 1,5 x l0 7 promastigotas de espécies de Leishmania e progressão das lesões subsequentes foram avaliados por até 16 semanas após a infecção. O hamster dourado foi escolhido porque é considerado o adequado modelo bio-para avaliação de medicamentos contra a Leishmania como eles são suscetíveis à infecção por diferentes espécies. Infecção cutânea de hamsters resulta em lesões crónicas, mas controlada, e uma evolução clínica com sinais semelhantes aos observados nos seres humanos. Portanto, o estabelecimento of a extensão da infecção por medição do tamanho da lesão de acordo com a área de endurecimento e úlceras é viável. Esta abordagem provou sua versatilidade e fácil gerenciamento durante a inoculação, acompanhamento e caracterização de lesões típicas (úlceras), aplicação de tratamentos através de diferentes formas e obtenção de amostras clínicas após os diferentes tratamentos. Usando este método, a qualidade de vida animal sobre locomoção, busca de comida e água, jogos e actividades sociais isalso preservados.

Protocol

1. A infecção de hamsters 1. Animais Puras do sexo feminino e masculino hamsters dourados (Mesocricetus auratus), 6-8 semanas, pesando 140-160 g são utilizados. Eles estão alojados na instalação para animais, em temperatura controlada alojamento, alimentados com ração de roedores padrão seco e equipado com água ad libitum. Todos os procedimentos envolvendo animais foram aprovados pelo Comitê de Ética institucional para uso animal Experime…

Discussion

A leishmaniose tegumentar americana é endêmica em regiões tropicais e neotropicais. É muitas vezes referido como um grupo de doenças por causa de o espectro variado de manifestações clínicas, que variam de pequenos nódulos cutâneas a destruição do tecido da mucosa bruto. A maioria dos medicamentos disponíveis são caros, exigem tratamentos longos e estão se tornando cada vez mais ineficaz, sendo necessária a descoberta de novas drogas.

O modelo do rato é amplamente utilizado,…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Este estudo foi suportado por concessões do Comitê de Pesquisa da Universidade de Antioquia (CODI), o Instituto Colombiano para o Desenvolvimento da Ciência e Tecnologia – COLCIENCIAS e O Centro de Desenvolvimento de Produtos contra Doenças Tropicais – CIDEPRO.

Materials

Name of the reagent Type Company Catalogue number
Ketamine Reagent Holliday –Scott S.A  
Xilacine Reagent Synthesis  
PBS Reagent GIBCO 14190-136
Digital caliper Equipment Fisher 15-077-958
Giemsa Reagent SIGMA GS1L-1L
Formalin Reagent Nova lab 11273
Paraffin Reagent Pechiney Plastic Packaging PM-996
Haemotoxilin Reagent Nova lab 10870103
Eosin   Nova lab 10870203
Kodak Ektachem dry chemistry Equipment Kodak Ektachem DT-60
meglumine antimoniate Reagent Aventis  
Microscopy Equipment Nikon YS2-T

References

  1. WHO. Control of the leishmaniasis. Report of a Meeting of the WHO Expert Committee on the Control of Leishmaniasis WHO. 949, (2010).
  2. Titus, R. G., Marchand, M., Boon, T., Louis, J. A. A limiting dilution assay for quantifying Leishmania major in tissues of infected mice. Parasite Immunol. 7, 545-555 (1985).
  3. Reynolds, K. M. The Kodak Ektachem dry layer technology for clinical chemistry. Upsala. J. Med. Sci. 91, 143-146 (1986).
  4. Handman, E., Ceredig, R., Mitchell, G. F. Murine cutaneous leishmaniasis: disease patterns in intact and nude mice of various genotypes and examination of some differences between normal and infected macrophages. Australian J. Exp. Biol. Med. Sci. 57, 9-29 (1979).
  5. Hanson, W., Chapman, W., Waits, V., Lovelace, J. Development of Leishmania (Viannia) panamensis lesions and relationship of numbers of amastigotes to lesion area antimony-treated and untreated hamsters. J. Parasitol. 77, 780-783 (1991).
  6. Henao, H. H., Osorio, Y., Saravia, N. G., Gómez, A., Travi, B. Efficacy and toxicity of pentavalentantimonials (Glucantime and Pentostam) in an American cutaneous leishmaniasis animal model: luminometry application. Biomédica. 24, 393-402 (2004).
  7. Travi, B. L., Martinez, J. E., Zea, A. Antimonial treatment of hamsters infected with Leishmania (Viannia) panamensis: assessment of parasitological cure with different therapeutic schedules. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 87, 567-569 (1993).
  8. Hommel, M., jaffe, C. L., Travi, B., Milon, G. Experimental models for leishmaniasis and for testing anti-leishmanial vaccines. Ann. Trop. Med. Parasitol. 89, 55-73 (1995).
  9. Travi, B. L., Osorio, Y., Saravia, N. G. The inflammatory response promotes cutaneous metastasis in hamsters infected with Leishmania (Viannia) panamensis. J. Parasitol. 82, 454-457 (1996).
  10. Travi, B. L., Osorio, Y. Failure of Albendazole as an alternative treatment of cutaneous Leishmaniasis in the hamster model. Memorias Instituto Oswaldo. 93, 515 (1998).
  11. Travi, B. L., Osorio, Y., Melby, P. C., Chandrasekar, B., Arteaga, L., Saravia, N. G. Gender is a major determinant of the clinical evolution and immune response in hamsters infected with Leishmania spp. Infect Immun. 70, 2288-2296 (2002).
  12. Osorio, Y., Melby, P. C., Pirmez, C., Chandrasekar, B., Guarín, N., Travi, B. L. The site of cutaneous infection influences the immunological response and clinical outcome of hamsters infected with Leishmania panamensis. Parasite Immunol. 25, 139-148 (2003).
  13. Osorio, Y., Bonilla, D. L., Peniche, A. G., Melby, P. C., Travi, B. L. Pregnancy enhances the innate immune response in experimental cutaneous leishmaniasis through hormone-modulated nitric oxide production. J. Leukoc. Biol. 83, 1413-1422 (2008).
  14. Espitia, C. M., Zhao, W., Saldarriaga, O., Osorio, Y., Harrison, L. M., Cappello, M., Travi, B. L., Melby, P. C. Duplex real-time reverse transcriptase PCR to determine cytokine mRNA expression in a hamster model of New World cutaneous leishmaniasis. BMC Immunol. 22, 11-31 (2010).

Play Video

Cite This Article
Robledo, S. M., Carrillo, L. M., Daza, A., Restrepo, A. M., Muñoz, D. L., Tobón, J., Murillo, J. D., López, A., Ríos, C., Mesa, C. V., Upegui, Y. A., Valencia-Tobón, A., Mondragón-Shem, K., RodrÍguez, B., Vélez, I. D. Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs. J. Vis. Exp. (62), e3533, doi:10.3791/3533 (2012).

View Video