<em> В естественных условиях</em> Рассечение взрослых<em> Drosophila</em> Брюшной нервной цепочки (VNC) демонстрируется. Данный метод вскрытия причин незначительный ущерб VNC позволяет последующих маркировки гигантские нейроны волокна с флуоресцентным красителем для высоким разрешением.
Abstract
Для анализа аксонального и дендритные морфологии нейронов, крайне важно получить точную маркировку нейронных структур. Подготовка и помечены образцы с практически нет повреждения тканей позволяет проанализировать морфологии клеток и сравнивать отдельные образцы друг с другом, следовательно, позволяющие идентификацию мутантных аномалий.
В методе вскрытия показали нервной системы остается главным образом внутри взрослой мухи. Через спинной разрез брюшной полости и грудной клетки открыты, и большинство внутренних органов удаляются. Только спинной стороне брюшной нервной цепочки (VNC) и соединительной шейки (CVC), содержащих большое аксоны гигантских волокон (GFS) 1 подвергаются, в то время как мозг с телом Ф. клетки и дендриты остается 2 в нетронутыми голову . В этот препарат наиболее нервы VNC должна оставаться привязаны к своим мышцам.
После вскрытия, внутриклеточные заполнение гигантского волокна (GF) с флуоресцентным красителем демонстрируется. В CVC GF аксонов расположены на спинной поверхности и тем самым могут быть легко визуализированы под микроскопом с дифференциалом интерференционного контраста (DIC) оптики. Это позволяет инъекции аксонов GF с красителем на этом сайте для обозначения всей GF включая аксонов и их терминалов в VNC. Этот метод приводит к надежным и сильным окрашивание GFs позволяет нейронам для включения в образ сразу же после заполнения epifluorescent микроскопом. Кроме того, флуоресцентный сигнал может быть усилен с помощью стандартных процедур иммуногистохимии 3 подходит для высокое разрешение конфокальной микроскопии.
Protocol
1. Рассечение брюшной нервной Разбор и красителя заполнения GF могут быть выполнены при комнатной температуре. Для всех рассечение шаги холодного (4 ° С), солевой должны быть использованы для замедляют метаболизм клетки и держать нейронов живыми дольше. Обезболить в…
Discussion
Нервной системы можно разрезать, не извлекая его из летать тела. Это имеет два преимущества, во-первых, вскрытие причин незначительный ущерб нервной системе, во-вторых, большинство нервов пребывания придает мышц и органов чувств. Выполнение рассечение, как описано, готовит образец для ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Проекта, описанного была поддержана грантом Количество R01HD050725 из Национального института детского здоровья и человеческого развития, TAG содержание несут их авторы и не обязательно отражает официальную точку зрения Национального института детского здоровья и человеческого развития или Национальный институт здоровья. Мы благодарим членов лаборатории Godenschwege а также Барбара Schreader к их участию в рукописи и видео.
Boerner, J., Godenschwege, T. A. Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection. J. Vis. Exp. (52), e3080, doi:10.3791/3080 (2011).