Almofadas de gordura mamárias descelularizantes: Derivando hidrogéis de matriz extracelular de almofadas de gordura mamária
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Alves et. al., Studying Normal Tissue Radiation Effects using Extracellular Matrix Hydrogels. J. Vis. Exp. (2019).
Este vídeo descreve uma técnica de derivar hidrogéis de matriz extracelularização descelularizando almofadas de gordura mamária murina após irradiação ex vivo para estudos in vitro. Este hidrogel ajuda a imitar o ambiente de tecido mamário in vivo pós-radiação para estudar o comportamento das células tumorais.
Protocol
1. Descelularização NOTA: Este procedimento foi adaptado de métodos publicados anteriormente focados na descelularização adiposa, que incluía o detergente iônico de desoxilato de sódio em vez de sulfato de dodecil de sódio para remover o DNA de forma eficiente. No dia 1, remova as almofadas de gordura mamária congelada ou MFPs a partir de -80 °C e descongele à temperatura ambiente. Uma vez descongelado, seco MFPs breveme…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| 10% Neutral Buffered Formalin, Cube with Spigot | VWR | 16004-128 | |
| 2-methylbutane | Alfa Aesar | 19387 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A1933-25G | |
| Dulbecco's phosphate-buffered saline | Gibco | 14040133 | |
| Fisher Healthcare Tissue-Plus O.C.T. Compound | Fisher Scientific | 23-730-571 | cryostat embedding medium |
| Kimtech Science Kimwipes | Kimberly Clark | delicate task wipes | |
| n-Propanol (Peroxide-Free/ Sequencing), Fisher BioReagents | Fisher Scientific | BP1130-500 | |
| PBS (10X), pH 7.4 | Quality Biological, Inc. | 119-069-151 | Phosphate-buffered saline |
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| Peracetic acid | Sigma-Aldrich | 77240-100ML | |
| Triton x-100 | Sigma-Aldrich | X100-100ML | t-Octylphenoxypolyethoxyethanol |
| Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red | Gibco | 25200-056 | |
| Richard-Allan Scientific Signature Series Hematoxylin 7211 | Richard-Allan Scientific | 7211 | |
| Whatman qualitative filter paper, Grade 4 | Whatman | 1004-110 | grade 4 qualitative filter paper |
| Xylenes (Certified ACS), Fisher Chemical | Fisher Scientific | X5-5 |
Cite This Article
Decellularizing Mammary Fat Pads: Deriving Extracellular Matrix Hydrogels from Mammary Fat Pads. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20229, doi: (2023).