Dezellularisierung von Mammary Fat Pads: Ableiten von extrazellulären Matrix-Hydrogelen von Mammary Fat Pads
Published: April 30, 2023
Abstract
Quelle: Alves et. al., Studying Normal Tissue Radiation Effects using Extracellular Matrix Hydrogels. J. Vis. Exp. (2019).
Dieses Video beschreibt eine Technik der Ableitung extrazellulärer Matrixhydrogele durch Dezellularisierung muriner Brustfettpolster nach ex vivo Bestrahlung für In-vitro-Studien. Dieses Hydrogel hilft, die in vivo Brustgewebe-Umgebung nach der Strahlenbehandlung zu imitieren, um das Verhalten von Tumorzellen zu untersuchen.
Protocol
1. Dezellularisierung HINWEIS: Dieses Verfahren wurde von zuvor veröffentlichten Methoden angepasst, die sich auf die Adipo-Dezellularisierung konzentrierten, die das Natriumdeoxycholat-Ionikumsaner statt Natriumdodecylsulfat umfasste, um DIE DNA effizient zu entfernen. Am 1. Taggefrorene Mammary Fat Pads oder MFPs von -80 °C entfernen und bei Raumtemperatur auftauen. Nach dem Auftauen, trocknen MFPs kurz auf einem empfindlichen A…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| 10% Neutral Buffered Formalin, Cube with Spigot | VWR | 16004-128 | |
| 2-methylbutane | Alfa Aesar | 19387 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A1933-25G | |
| Dulbecco's phosphate-buffered saline | Gibco | 14040133 | |
| Fisher Healthcare Tissue-Plus O.C.T. Compound | Fisher Scientific | 23-730-571 | cryostat embedding medium |
| Kimtech Science Kimwipes | Kimberly Clark | delicate task wipes | |
| n-Propanol (Peroxide-Free/ Sequencing), Fisher BioReagents | Fisher Scientific | BP1130-500 | |
| PBS (10X), pH 7.4 | Quality Biological, Inc. | 119-069-151 | Phosphate-buffered saline |
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| Peracetic acid | Sigma-Aldrich | 77240-100ML | |
| Triton x-100 | Sigma-Aldrich | X100-100ML | t-Octylphenoxypolyethoxyethanol |
| Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red | Gibco | 25200-056 | |
| Richard-Allan Scientific Signature Series Hematoxylin 7211 | Richard-Allan Scientific | 7211 | |
| Whatman qualitative filter paper, Grade 4 | Whatman | 1004-110 | grade 4 qualitative filter paper |
| Xylenes (Certified ACS), Fisher Chemical | Fisher Scientific | X5-5 |
Cite This Article
Decellularizing Mammary Fat Pads: Deriving Extracellular Matrix Hydrogels from Mammary Fat Pads. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20229, doi: (2023).