Decellularizing Mammary Fat Pads: Afledning ekstracellulære Matrix Hydrogels fra Mammary Fat Pads
Published: April 30, 2023
Abstract
Kilde: Alves et al., Studerer normale vævsstrålingseffekter ved hjælp af ekstracellulære matrixhydrogels.
Denne video beskriver en teknik til at udlede ekstracellulære matrixhydrogels ved at decellularisere murine mammary fedtpuder efter ex vivo bestråling til in vitro-undersøgelser. Denne hydrogel hjælper med at efterligne in vivo brystvæv miljø post-strålebehandling for at studere tumor celle adfærd.
Protocol
1. Decellularisering BEMÆRK: Denne procedure blev tilpasset fra tidligere offentliggjorte metoder med fokus på fedtdecellularisering, som omfattede natriumdeoxycholationisk ioniske vaskemiddel snarere end natrium dodecyl sulfat for at fjerne DNA effektivt. På dag 1fjernes frosne Mammary Fat-puder eller MFP’er fra -80 °C og optøs ved stuetemperatur. Når optøet, tør MFPs kort på en delikat opgave tørre. Afvej MMFP’erne ved h…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| 10% Neutral Buffered Formalin, Cube with Spigot | VWR | 16004-128 | |
| 2-methylbutane | Alfa Aesar | 19387 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A1933-25G | |
| Dulbecco's phosphate-buffered saline | Gibco | 14040133 | |
| Fisher Healthcare Tissue-Plus O.C.T. Compound | Fisher Scientific | 23-730-571 | cryostat embedding medium |
| Kimtech Science Kimwipes | Kimberly Clark | delicate task wipes | |
| n-Propanol (Peroxide-Free/ Sequencing), Fisher BioReagents | Fisher Scientific | BP1130-500 | |
| PBS (10X), pH 7.4 | Quality Biological, Inc. | 119-069-151 | Phosphate-buffered saline |
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| Peracetic acid | Sigma-Aldrich | 77240-100ML | |
| Triton x-100 | Sigma-Aldrich | X100-100ML | t-Octylphenoxypolyethoxyethanol |
| Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red | Gibco | 25200-056 | |
| Richard-Allan Scientific Signature Series Hematoxylin 7211 | Richard-Allan Scientific | 7211 | |
| Whatman qualitative filter paper, Grade 4 | Whatman | 1004-110 | grade 4 qualitative filter paper |
| Xylenes (Certified ACS), Fisher Chemical | Fisher Scientific | X5-5 |
Cite This Article
Decellularizing Mammary Fat Pads: Deriving Extracellular Matrix Hydrogels from Mammary Fat Pads. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20229, doi: (2023).