Dieses Video beschreibt die nicht-enzymatische Dissoziation von frischem menschlichem Gewebe, um lebensfähige Zellen zu erhalten. Die Technik wird zur qualitativen und quantitativen Analyse von CD45-positiven Zellen (Lymphozyten/Leukozyten) in verschiedenen normalen und bösartigen menschlichen Geweben verwendet.
Protocol
1. Vorbereitung des Gewebehomogenats Sesektierte Gewebe (bösartiges und normales Gewebe aus dem Operationssaal resektiert) befinden sich im Pathologielabor von geschultem Personal für die sofortige Abholung. Tumor, NANT (möglichst weit vom Tumor entfernt) und normale Gewebefragmente werden routinemäßig innerhalb von 1 – 3 Stunden chirurgischer Exzision in einem BSL2-Labor unter Verwendung von Standard-Biosicherheitsverfahren für menschlichegewebe verarbeitet. Ein Flussdiagramm des Protokolls ist in <stron…
Representative Results
Abbildung 1: Protokollflussdiagramm. Unser Verfahren zur Verarbeitung von frischem menschlichem Gewebe und einige analytische Ansätze, die anschließend zur Beurteilung von Lymphozyten verwendet werden können, die menschlichegewebe infiltrieren, werden gezeigt. Abbildung 2: H&E-gefärbtes Bild eines B…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
GentleMacs Dissociator
Miltenyi Biotec
130-093-235
BD Medimachine is somewhat equivalent
Centrifuge 5810 R
Eppendorf
or other standard table top centrifuge
Centrifuge 5417 R
Eppendorf
or other standard microcentrifuge
Esco Class II A2 Biosafety Cabinet
ESCO global
or other standard BSL2 hood
Inverted Microscope
Nikon eclipse TS100
or other microscope compatible for a hemacytometer