Dissociação Mecânica: Um Método para Obter Células Viáveis de um tecido
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Garaud et. al., Um Protocolo Simples e Rápido para Tecidos Humanos Frescos Não Enzimaticamente Dissociados para a Análise de Linfócitos Infiltrados. J. Vis. Exp. (2014).
Este vídeo descreve a dissociação não enzimática do tecido humano fresco para obter células viáveis. A técnica é utilizada para análise qualitativa e quantitativa de células positivas CD45 (linfócitos/leucócitos) presentes em diversos tecidos humanos normais e malignos.
Protocol
1. Preparação do homogeneizar tecido Os tecidos dissecados (tecido maligno e normal ressecado da sala de cirurgia) estão no laboratório de patologia por pessoal treinado para coleta imediata. Tumor, NANT (retirados da maior distância possível do tumor) e fragmentos normais de tecido são rotineiramente processados dentro de 1 – 3 horas de excisão cirúrgica em um laboratório BSL2 usando procedimentos padrão de biossegurança para tecidos humanos. Um fluxograma do protocolo é ilustrado na Figur…
Representative Results
Figura 1: Fluxograma de protocolo. Nosso procedimento para o processamento de tecidos humanos frescos e algumas abordagens analíticas que podem ser posteriormente usadas para avaliar linfócitos infiltrados em tecidos humanos são mostrados. Figura 2: Imagem manchada de H&E de uma impressão de tecido …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| GentleMacs Dissociator | Miltenyi Biotec | 130-093-235 | BD Medimachine is somewhat equivalent |
| Centrifuge 5810 R | Eppendorf | or other standard table top centrifuge | |
| Centrifuge 5417 R | Eppendorf | or other standard microcentrifuge | |
| Esco Class II A2 Biosafety Cabinet | ESCO global | or other standard BSL2 hood | |
| Inverted Microscope | Nikon eclipse TS100 | or other microscope compatible for a hemacytometer | |
| Bürker Chamber Marienfield | 640210 | or other standard hemacytometer | |
| Navios Flow Cytometer | Beckman Coulter | or other flow cytometer (8-10 color recommended) | |
| GentleMacs C-Tube | Miltenyi Biotec | 130-096-344 | BD Medimachine uses Filcon |
| Cell Culture Dish | Sarstedt | 72,710 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Disposable Scalpel | Swann-Morton | 510 | or standard single use sterile scalpel |
| BD Cell Strainer 40 µm | Becton Dickinson | 734-0002 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 50 ml | Becton Dickinson | 352070 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 15 ml | Becton Dickinson | 352097 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD FACS Tube 5 ml | Becton Dickinson | 352008 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Sterile Pasteur Pipette 5 ml | VWR | 612-1685 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Microfuge Tube 1.5 ml | Eppendorf | 7805-00 | or other non-pyrogenic plasticware |
| X-Vivo 20 | Lonza | BE04-448Q | serum-free medium recommended |
| Phosphate buffered saline | Lonza | BE17-516F | standard physiological PBS |
| Trypan blue | VWR | 17942E | or other vital stain |
Cite This Article
Mechanical Dissociation: A Method to Obtain Viable Cells from a Tissue. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20225, doi: (2023).