Механическая диссоциация: метод получения жизнеспособных клеток из ткани
Published: April 30, 2023
Abstract
Источник: Garaud et. al., Простой и быстрый протокол к несущественно разобщенным свежим человеческим тканям для анализа проникновения лимфоцитов. J. Vis. Exp. (2014).
Это видео описывает не-энзиматической диссоциации свежих человеческих тканей для получения жизнеспособных клеток. Методика используется для качественного и количественного анализа положительных клеток CD45 (лимфоцитов/лейкоцитов), присутствующих в различных нормальных и злокачественных тканях человека.
Protocol
1. Подготовка гомогената тканей Рассеченные ткани (злокачественные и нормальные ткани, ресектированные из операционной) находятся в лаборатории патологии обученным персоналом для немедленного пикапа. Опухоль, НАНТ (взятые на расстояние от опухоли, насколько это возможно) и норма?…
Representative Results
Рисунок 1: Диаграмма потока протокола. Показана наша процедура обработки свежих тканей человека и некоторые аналитические подходы, которые впоследствии могут быть использованы для оценки лимфоцитов, проникающих в ткани человека.<…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| GentleMacs Dissociator | Miltenyi Biotec | 130-093-235 | BD Medimachine is somewhat equivalent |
| Centrifuge 5810 R | Eppendorf | or other standard table top centrifuge | |
| Centrifuge 5417 R | Eppendorf | or other standard microcentrifuge | |
| Esco Class II A2 Biosafety Cabinet | ESCO global | or other standard BSL2 hood | |
| Inverted Microscope | Nikon eclipse TS100 | or other microscope compatible for a hemacytometer | |
| Bürker Chamber Marienfield | 640210 | or other standard hemacytometer | |
| Navios Flow Cytometer | Beckman Coulter | or other flow cytometer (8-10 color recommended) | |
| GentleMacs C-Tube | Miltenyi Biotec | 130-096-344 | BD Medimachine uses Filcon |
| Cell Culture Dish | Sarstedt | 72,710 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Disposable Scalpel | Swann-Morton | 510 | or standard single use sterile scalpel |
| BD Cell Strainer 40 µm | Becton Dickinson | 734-0002 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 50 ml | Becton Dickinson | 352070 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 15 ml | Becton Dickinson | 352097 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD FACS Tube 5 ml | Becton Dickinson | 352008 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Sterile Pasteur Pipette 5 ml | VWR | 612-1685 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Microfuge Tube 1.5 ml | Eppendorf | 7805-00 | or other non-pyrogenic plasticware |
| X-Vivo 20 | Lonza | BE04-448Q | serum-free medium recommended |
| Phosphate buffered saline | Lonza | BE17-516F | standard physiological PBS |
| Trypan blue | VWR | 17942E | or other vital stain |
Cite This Article
Mechanical Dissociation: A Method to Obtain Viable Cells from a Tissue. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20225, doi: (2023).