Denne videoen beskriver den ikke-enzymatiske dissosiasjonen av friskt menneskelig vev for å oppnå levedyktige celler. Teknikken brukes til kvalitativ og kvantitativ analyse av CD45 positive celler (lymfocytter/leukocytter) tilstede i ulike normale og ondartede menneskelige vev.
Protocol
1. Forberedelse av vevet homogenat Dissekerte resected vev (ondartet og normalt vev resected fra operasjonsrommet) er i patologi lab av opplært personell for umiddelbar henting. Tumor, NANT (tatt lengst avstand fra svulsten som mulig) og normale vevsfragmenter behandles rutinemessig innen 1 – 3 timer kirurgisk eksisjon i et BSL2-laboratorium ved hjelp av standard biosikkerhetsprosedyrer for humant vev. Et flytskjema for protokollen er illustrert i figur 1. Vei alle vevsfragmenter (no…
Representative Results
Figur 1: Protokollflytskjema. Vår prosedyre for behandling av friskt humant vev og noen analytiske tilnærminger som senere kan brukes til å vurdere lymfocytter som infiltrerer menneskelig vev, vises. Figur 2: H&E farget bilde av et brystsvulstvevsavtrykk. Dette avtrykket, tatt fra et friskt…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
GentleMacs Dissociator
Miltenyi Biotec
130-093-235
BD Medimachine is somewhat equivalent
Centrifuge 5810 R
Eppendorf
or other standard table top centrifuge
Centrifuge 5417 R
Eppendorf
or other standard microcentrifuge
Esco Class II A2 Biosafety Cabinet
ESCO global
or other standard BSL2 hood
Inverted Microscope
Nikon eclipse TS100
or other microscope compatible for a hemacytometer