기계적 해리: 조직에서 실행 가능한 세포를 얻는 방법
Published: April 30, 2023
Abstract
출처: Garaud 외. 알.,비 효소적으로 침투 림프구의 분석을위한 신선한 인간 조직을 해리하는 간단하고 빠른 프로토콜. J. Vis. Exp. (2014).
이 비디오는 실행 가능한 세포를 얻기 위해 신선한 인간 조직의 비 효소 해리를 설명합니다. 이 기술은 다양한 정상 및 악성 인간 조직에 존재하는 CD45 양성 세포 (림프구/백혈구)의 정성적 및 정량적 분석을 위해 사용됩니다.
Protocol
1. 조직 호모게네이트의 준비 해부 된 조직 (수술실에서 제복된 악성 및 정상 조직)은 즉시 픽업을위한 숙련 된 인력에 의해 병리학 실험실에 있습니다. 종양, NANT (가능한 한 종양에서 가장 먼 거리를 촬영) 및 정상적인 조직 단편은 인간 조직에 대한 표준 생물 안전 절차를 사용하여 BSL2 실험실에서 수술 절제의 1 – 3 시간 이내에 정기적으로 처리됩니다. 프로토콜의 흐름 차트는 도 1에…
Representative Results
그림 1: 프로토콜 흐름 차트입니다. 인간 조직에 침투하는 림프구를 평가하는 데 사용할 수있는 신선한 인간 조직 및 일부 분석 적 접근법을 처리하는 절차가 표시됩니다. 그림 2: 유방 종양 조직 각인의 H&E 염색 이미지. 신?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| GentleMacs Dissociator | Miltenyi Biotec | 130-093-235 | BD Medimachine is somewhat equivalent |
| Centrifuge 5810 R | Eppendorf | or other standard table top centrifuge | |
| Centrifuge 5417 R | Eppendorf | or other standard microcentrifuge | |
| Esco Class II A2 Biosafety Cabinet | ESCO global | or other standard BSL2 hood | |
| Inverted Microscope | Nikon eclipse TS100 | or other microscope compatible for a hemacytometer | |
| Bürker Chamber Marienfield | 640210 | or other standard hemacytometer | |
| Navios Flow Cytometer | Beckman Coulter | or other flow cytometer (8-10 color recommended) | |
| GentleMacs C-Tube | Miltenyi Biotec | 130-096-344 | BD Medimachine uses Filcon |
| Cell Culture Dish | Sarstedt | 72,710 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Disposable Scalpel | Swann-Morton | 510 | or standard single use sterile scalpel |
| BD Cell Strainer 40 µm | Becton Dickinson | 734-0002 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 50 ml | Becton Dickinson | 352070 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 15 ml | Becton Dickinson | 352097 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD FACS Tube 5 ml | Becton Dickinson | 352008 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Sterile Pasteur Pipette 5 ml | VWR | 612-1685 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Microfuge Tube 1.5 ml | Eppendorf | 7805-00 | or other non-pyrogenic plasticware |
| X-Vivo 20 | Lonza | BE04-448Q | serum-free medium recommended |
| Phosphate buffered saline | Lonza | BE17-516F | standard physiological PBS |
| Trypan blue | VWR | 17942E | or other vital stain |
Cite This Article
Mechanical Dissociation: A Method to Obtain Viable Cells from a Tissue. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20225, doi: (2023).