Dissociation mécanique : méthode pour obtenir des cellules viables à partir d’un tissu
Published: April 30, 2023
Abstract
Source : Garaud et coll., A Simple and Rapid Protocol to Non-enzymatically Dissociate Fresh Human Tissues for the Analysis of Infiltrating Lymphocytes. J. Vis. Exp. (2014).
Cette vidéo décrit la dissociation non enzymatique du tissu humain frais pour obtenir des cellules viables. La technique est utilisée pour l’analyse qualitative et quantitative des cellules positives CD45 (lymphocytes/leucocytes) présentes dans divers tissus humains normaux et malins.
Protocol
1. Préparation de l’homogénéité tissulaire Les tissus réséqués disséqués (tissus malins et normaux réséqués de la salle d’opération) sont dans le laboratoire de pathologie par du personnel qualifié pour un ramassage immédiat. La tumeur, le NANT (pris la distance la plus éloignée possible de la tumeur) et les fragments normaux de tissu sont systématiquement traités dans un délai de 1 à 3 heures de l’excision chirurgicale dans un laboratoire de BSL2 utilisant des procédures standard de…
Representative Results
Figure 1 : Diagramme de flux de protocole. Notre procédure de traitement des tissus humains frais et certaines approches analytiques qui peuvent ensuite être utilisées pour évaluer les lymphocytes infiltrant les tissus humains sont montrées. Figure 2 : Image souillée de H&E d’une empreinte de ti…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| GentleMacs Dissociator | Miltenyi Biotec | 130-093-235 | BD Medimachine is somewhat equivalent |
| Centrifuge 5810 R | Eppendorf | or other standard table top centrifuge | |
| Centrifuge 5417 R | Eppendorf | or other standard microcentrifuge | |
| Esco Class II A2 Biosafety Cabinet | ESCO global | or other standard BSL2 hood | |
| Inverted Microscope | Nikon eclipse TS100 | or other microscope compatible for a hemacytometer | |
| Bürker Chamber Marienfield | 640210 | or other standard hemacytometer | |
| Navios Flow Cytometer | Beckman Coulter | or other flow cytometer (8-10 color recommended) | |
| GentleMacs C-Tube | Miltenyi Biotec | 130-096-344 | BD Medimachine uses Filcon |
| Cell Culture Dish | Sarstedt | 72,710 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Disposable Scalpel | Swann-Morton | 510 | or standard single use sterile scalpel |
| BD Cell Strainer 40 µm | Becton Dickinson | 734-0002 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 50 ml | Becton Dickinson | 352070 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 15 ml | Becton Dickinson | 352097 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD FACS Tube 5 ml | Becton Dickinson | 352008 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Sterile Pasteur Pipette 5 ml | VWR | 612-1685 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Microfuge Tube 1.5 ml | Eppendorf | 7805-00 | or other non-pyrogenic plasticware |
| X-Vivo 20 | Lonza | BE04-448Q | serum-free medium recommended |
| Phosphate buffered saline | Lonza | BE17-516F | standard physiological PBS |
| Trypan blue | VWR | 17942E | or other vital stain |
Cite This Article
Mechanical Dissociation: A Method to Obtain Viable Cells from a Tissue. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20225, doi: (2023).