Denne video beskriver den ikke-enzymatiske dissociation af frisk humant væv for at opnå levedygtige celler. Teknikken anvendes til kvalitativ og kvantitativ analyse af CD45 positive celler (lymfocytter/ leukocytter), der findes i forskellige normale og ondartede humane væv.
Protocol
1. Forberedelse af vævs homogenatet Dissekeret resected væv (ondartet og normalt væv resected fra operationsstuen) er i patologi lab af uddannet personale til øjeblikkelig afhentning. Tumor, NANT (taget længst afstand fra tumoren som muligt) og normale vævsfragmenter behandles rutinemæssigt inden for 1 – 3 timers kirurgisk udskæring i et BSL2-laboratorium ved hjælp af standard biosikkerhedsprocedurer for humant væv. Et rutediagram over protokollen er illustreret i figur 1. V…
Representative Results
Figur 1: Protokolrutediagram. Vores procedure for behandling af friske humane væv og nogle analytiske tilgange, der efterfølgende kan bruges til at vurdere lymfocytter infiltrere humane væv er vist. Figur 2: H&E farvet billede af et brysttumorvævsaftryk. Dette aftryk, taget fra en frisk br…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
GentleMacs Dissociator
Miltenyi Biotec
130-093-235
BD Medimachine is somewhat equivalent
Centrifuge 5810 R
Eppendorf
or other standard table top centrifuge
Centrifuge 5417 R
Eppendorf
or other standard microcentrifuge
Esco Class II A2 Biosafety Cabinet
ESCO global
or other standard BSL2 hood
Inverted Microscope
Nikon eclipse TS100
or other microscope compatible for a hemacytometer