التفكك الميكانيكي: طريقة للحصول على خلايا قابلة للحياة من نسيج
Published: April 30, 2023
Abstract
المصدر: Garaud et al., بروتوكول بسيط وسريع للأنسجة البشرية الطازجة غير الإنزيمية لتحليل الخلايا الليمفاوية المتسللة. ج. فيس إكسب (2014).
يصف هذا الفيديو التفكك غير الأنزيمي للأنسجة البشرية الطازجة للحصول على خلايا قابلة للحياة. يتم استخدام هذه التقنية للتحليل النوعي والكمي للخلايا الإيجابية CD45 (الخلايا الليمفاوية / الكريات البيض) الموجودة في مختلف الأنسجة البشرية الطبيعية والخبيثة.
Protocol
1. إعداد الأنسجة متجانسة تشريح الأنسجة التي تم استئصالها (الأنسجة الخبيثة والعادية التي تم استئصالها من غرفة العمليات) موجودة في مختبر علم الأمراض من قبل موظفين مدربين للاستلام الفوري. الورم، NANT (تؤخذ أبعد مسافة ممكنة من الورم) وشظايا الأنسجة الطبيعية تتم معالجتها بشكل روتيني في غضون…
Representative Results
الشكل 1: مخطط تدفق البروتوكول. يتم عرض إجراءاتنا لمعالجة الأنسجة البشرية الطازجة وبعض النهج التحليلية التي يمكن استخدامها في وقت لاحق لتقييم الخلايا الليمفاوية التي تتسلل إلى الأنسجة البشرية. <img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/fil…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| GentleMacs Dissociator | Miltenyi Biotec | 130-093-235 | BD Medimachine is somewhat equivalent |
| Centrifuge 5810 R | Eppendorf | or other standard table top centrifuge | |
| Centrifuge 5417 R | Eppendorf | or other standard microcentrifuge | |
| Esco Class II A2 Biosafety Cabinet | ESCO global | or other standard BSL2 hood | |
| Inverted Microscope | Nikon eclipse TS100 | or other microscope compatible for a hemacytometer | |
| Bürker Chamber Marienfield | 640210 | or other standard hemacytometer | |
| Navios Flow Cytometer | Beckman Coulter | or other flow cytometer (8-10 color recommended) | |
| GentleMacs C-Tube | Miltenyi Biotec | 130-096-344 | BD Medimachine uses Filcon |
| Cell Culture Dish | Sarstedt | 72,710 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Disposable Scalpel | Swann-Morton | 510 | or standard single use sterile scalpel |
| BD Cell Strainer 40 µm | Becton Dickinson | 734-0002 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 50 ml | Becton Dickinson | 352070 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 15 ml | Becton Dickinson | 352097 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD FACS Tube 5 ml | Becton Dickinson | 352008 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Sterile Pasteur Pipette 5 ml | VWR | 612-1685 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Microfuge Tube 1.5 ml | Eppendorf | 7805-00 | or other non-pyrogenic plasticware |
| X-Vivo 20 | Lonza | BE04-448Q | serum-free medium recommended |
| Phosphate buffered saline | Lonza | BE17-516F | standard physiological PBS |
| Trypan blue | VWR | 17942E | or other vital stain |
Cite This Article
Mechanical Dissociation: A Method to Obtain Viable Cells from a Tissue. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20225, doi: (2023).