Disociación mecánica: un método para obtener células viables de un tejido
Published: April 30, 2023
Abstract
Fuente: Garaud et. al., Un protocolo simple y rápido para disociar no enzimáticamente los tejidos humanos frescos para el análisis de linfocitos infiltrados. J. Vis. Exp. (2014).
Este video describe la disociación no enzimática del tejido humano fresco para obtener células viables. La técnica se utiliza para el análisis cualitativo y cuantitativo de células positivas CD45 (linfocitos/leucocitos) presentes en varios tejidos humanos normales y malignos.
Protocol
1. Preparación del homogeneato de tejido La disección de tejidos resecados (tejido maligno y normal reseccionado del quirófano) se encuentran en el laboratorio de patología por personal capacitado para su recogida inmediata. Tumor, NANT (tomado la distancia más alejada del tumor como sea posible) y fragmentos de tejido normales se procesan rutinariamente dentro de 1 – 3 horas de escisión quirúrgica en un laboratorio BSL2 utilizando procedimientos estándar de bioseguridad para tejidos humanos. Se ilustra…
Representative Results
Figura 1: Gráfico de flujo de protocolo. Se muestra nuestro procedimiento para procesar tejidos humanos frescos y algunos enfoques analíticos que posteriormente se pueden utilizar para evaluar los linfocitos que se infiltran en los tejidos humanos. Figura 2: Imagen manchada de H&E de una huella de tej…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| GentleMacs Dissociator | Miltenyi Biotec | 130-093-235 | BD Medimachine is somewhat equivalent |
| Centrifuge 5810 R | Eppendorf | or other standard table top centrifuge | |
| Centrifuge 5417 R | Eppendorf | or other standard microcentrifuge | |
| Esco Class II A2 Biosafety Cabinet | ESCO global | or other standard BSL2 hood | |
| Inverted Microscope | Nikon eclipse TS100 | or other microscope compatible for a hemacytometer | |
| Bürker Chamber Marienfield | 640210 | or other standard hemacytometer | |
| Navios Flow Cytometer | Beckman Coulter | or other flow cytometer (8-10 color recommended) | |
| GentleMacs C-Tube | Miltenyi Biotec | 130-096-344 | BD Medimachine uses Filcon |
| Cell Culture Dish | Sarstedt | 72,710 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Disposable Scalpel | Swann-Morton | 510 | or standard single use sterile scalpel |
| BD Cell Strainer 40 µm | Becton Dickinson | 734-0002 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 50 ml | Becton Dickinson | 352070 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 15 ml | Becton Dickinson | 352097 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD FACS Tube 5 ml | Becton Dickinson | 352008 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Sterile Pasteur Pipette 5 ml | VWR | 612-1685 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Microfuge Tube 1.5 ml | Eppendorf | 7805-00 | or other non-pyrogenic plasticware |
| X-Vivo 20 | Lonza | BE04-448Q | serum-free medium recommended |
| Phosphate buffered saline | Lonza | BE17-516F | standard physiological PBS |
| Trypan blue | VWR | 17942E | or other vital stain |
Cite This Article
Mechanical Dissociation: A Method to Obtain Viable Cells from a Tissue. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20225, doi: (2023).