Enzymatic Sindirim ve Manuel Ayrışma: C. elegans Embriyolarını Hücre Kültürüne Hazırlama Yöntemi

Published: April 30, 2023

Abstract

Kaynak: Sangaletti, R. ve Bianchi, L. Embriyonik C. elegans Hücrelerini Kültleme Yöntemi. J. Vis. Exp. (2013). 

Bu video, embriyonik C. elegans hücrelerini in vitro olarak izole etmek ve steril olarak kültüre etmek için bir yöntem tanıtır.

Protocol

1. Embriyonik Hücrelerin Ayrışması İşlemin sonraki adımlarını steril koşullar altında laminer akış davlumbaz kullanarak uygulayın. Hayvanlar bakteri plakalarında önlük iken, yıkamalar ve çamaşır suyu içeren lizis çözeltisi ile tedavi, tüm bakteriler olmasa bile en çok ortadan kaldırmalıdır. Böylece prosedürün bu noktasında laminar davlumbaz kullanmak yumurta süspansiyonunun yeni kirlenmesini önler. Peletlenmiş yumurtaları 1 ml 2 mg/ml chitinase (yu…

Representative Results

Şekil 1. C. elegans embriyolarını kitin tedavisinden önce ve sonra. (A) Kitine maruz kalmadan önce yumurtaların fotoğrafı. Ok, bir embriyoyu çevreleyen şeffaf ve bozulmamış yumurta kabuğuna işaret eder. (B) Yumurtalar 10 dakika boyunca chitinase ile muamele edilir. Yumurta kabukları sindirilmiştir ve artık embriyoların etraf?…

Materials

REAGENTS
Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid Invitrogen 11415-064
Fetal Bovine Serum Invitrogen 16140-063
Penicillin-streptomycin Sigma P4333-100ML
Chitinase from Streptomyces Griseus Sigma C6137-25UN
Peanut Lectin Sigma L0881-10MG
EQUIPMENT
101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips USA Scentific 1111-2821
10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped USA Scentific 1071-0810
Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector VWR International Inc. 89079-974
Portable Pipet Aid, Drummond VWR International Inc. 53498-103
Transfer Plastic Pipet Sterile VWR International Inc. 14670-114
15 ml Conical Tube USA Scentific 1475-1611
Sterile 18 gauge Needles Becton, Dickinson and Co. 305196
Sterile 10 ml Syringes Becton, Dickinson and Co. 305482
Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size Corning 431224
Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane VWR International Inc. 28144-095
60×15 mm Petri Dish Sterile VWR International Inc. 82050-548
100×15 mm Petri Dish Sterile VWR International Inc. 82050-912
12 mm Diameter Glass Coverslips VWR International Inc. 48300-560
Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid Thomas scientific 6902A09
Dumont #5- Fine Forceps Fine Science Tools 11254-20
Centrifuge 5702 Eppendorf 22629883
Laminar Flow Hood
Inverted Microscope with x10 objective
Ambient air humidified Incubator

Play Video

Cite This Article
Enzymatic Digestion and Manual Dissociation: A Method to Prepare C. elegans Embryos for Cell Culture. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20159, doi: (2023).

View Video