La medición de la resistencia a la flexión de las células bacterianas usando una trampa óptica

Se cultivan las células de E. coli en caldo Luria-beltrani (LB) para la fase exponencial (OD = 0.2-0.4). Mantener el cultivo en LB suplementado con 50 mg / ml de cefalexina durante 15 minutos para inducir el crecimiento de filamentosas, y luego se concentran la cultura por 5 veces por centrifugación. Hacer PEI cubreobjetos recubiertos por las corrientes de 1% polietilenimina diluida en agua en una cámara de flujo, y lavar con agua después de una incubación de 5 minutos. El flujo del cultivo de células concentradas en la cámara, y se lava con una mezcla de LB y cefalexina (50μg/mL) después de 3 minutos para eliminar las células sueltas. Incubar la cámara a 37 ° C durante 30 minutos a 1 hora para permitir que las células adjunto crecer antes de colocarlo en el instrumento de captura óptica. Hacer polilisina revestida de piedras mediante la incubación de 0,5 m de diámetro, bolas de poliestireno (Laboratorios explosiones) en el 0,1% de polilisina diluido en agua durante 30 minutos. Luego lave las cuentas 3 veces y se resuspenden en agua. Diluir la solución de cuentas por un factor de dos en LB con cefalexina (50μg/mL), y agregarlo a la cámara de flujo. Ópticamente una trampa flotante de cuentas y el tacto a la extremidad libre de una célula. (Nosotros usamos un Mad City Laboratorios etapa piezoeléctricos para el control del movimiento de la muestra.) Cuando una combinación adecuada de cuentas / célula se encuentra, lavar la cámara con cefalexina en LB (50μg/mL) para eliminar las perlas sueltas. Ejecutar custom-written programa LabView para aplicar las fuerzas de flexión a la celda y registrar los datos de fuerza-desplazamiento. Detalles del programa Calibrar la respuesta del detector de barrido de exploración que se adjunta en el cordón de rayo láser de detección y registro de las señales de tensión en 3D PSD. Identificar el eje de células largas a la imagen de microscopio. Mover celdas en los pasos en una dirección perpendicular al eje de la célula de largo. Registrar la distancia recorrida y el desplazamiento de la trampa óptica. Convertir el desplazamiento a la fuerza aplicada con la rigidez trampa medido previamente y guardar desplazamiento de su punta y la fuerza de archivo. Secretos para el éxito: En el paso 8), se necesita encontrar una celda con un fin bien definido atascado. Algunas células son atrapados en un extremo, y la fuerza de flexión en la otra punta lleva a un giro de células enteras en lugar de doblar. Un par adecuado se encuentra al doblar cada célula rápidamente a mano con el movimiento etapa joystick controlado. Los resultados representativos: Figura 1. Esta figura muestra de fuerza-desplazamiento de datos para una sola celda. La pendiente de esta línea es la rigidez a la flexión de la célula.