Larva Lenf Bezi Diseksiyonu: Drosophila Hemosit Üreten Organın İzolasyonu

Published: April 30, 2023

Abstract

Kaynak: Reimels, T. A. ve Pfleger, C.M. Drosophila Larvalarında Lenf Bezi ve Hemositleri İnceleme Yöntemleri. J. Vis. Exp. (2016).

Bu video, sinek larvasında hematopoezisin birincil yeri olan Drosophila lenf bezini açıklar ve immünofizokimya ve floresan görüntüleme için organı parçalamak ve monte etmek için örnek bir protokol göstermektedir.

Protocol

Bu protokol Reimels ve Pfleger’den bir alıntıdır, Drosophila Larvalarında Lenf Bezi ve Hemositleri İnceleme Yöntemleri, J. Vis. Exp. (2016). 1. Larva Lenf Bezi İmmünohistok entrika NOT: Lenf bezi, sırt tarafındaki beynin biraz altında bir larvanın ön ucundan yaklaşık üçte bir uzunluğunda bulunur. (Şekil 1B’dekioka bakın.) Lenf bezi sırt damarını kuşat…

Representative Results

Şekil 1: In Vivo Kristal Hücre Melanizasyonu. A) Larvalar ısınmadan önce PCR tüplerine ayrı ayrı yerleştirildi. Kırmızı oklar, tüplerin dibinde olmayan larvaları gösterir. B) Isıtma sonrası tipik bir kristal hücre melanizasyon deseni, bazen lenf bezini ortaya çıkaran (ok; sırt tarafı gösterilmiştir, ön taraf bırakılır). Ölçek çubuğu 1 mm’yi temsil …

Materials

PBS tablets MP Biomedicals 2810305
dissecting dish Corning 7220-85
microcentrifuge tube Denville C2170
silicone dissecting pad, made from Sylgard 184 kit Krayden (distributed through Fisher) NC9644388 (Fisher catalog number) Made in petri dish by mixing components of Sylgard elastomer kit according to manufacturer instructions.
stereomicroscope Morrell Instruments (Nikon distributor) mna42000, mma36300 Nikon models SMZ1000 and SMZ645
tissue wipe VWR 82003-820
forceps Electron Microscopy Sciences 72700-DZ
p200 pipette Eppendorf 3120000054
formaldehyde Fisher BP531-500
Triton Fisher BP151-500
Tween 20 Fisher BP337-500
bovine serum albumin Rocky Mountain Biologicals BSA-BSH-01K
normal goat serum Sigma G9023-10ML
normal donkey serum Sigma D9663-10ML
200 proof ethanol VWR V1001
N-propyl gallate MP Biomedicals 102747
glycerol VWR EM-4750
DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole) Fisher 62248
microscope cover glass, 18 mm circular Fisher 12-545-100
glass microscope slides Fisher 22-034-980
24-well plate Corning 351147
disposable transfer pipet Fisher 13-711-9AM
fluorescence microscope Zeiss Axio Imager.Z1

Play Video

Cite This Article
Larval Lymph Gland Dissection: Isolating the Drosophila Hemocyte-Producing Organ. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20117, doi: (2023).

View Video