В этом видеоролике показано, как измерить ячейки вторжения через клеточные культуры вставками использованием флуоресценции основе методологии.
Отличительной чертой метастатических клеток является их способность к вторжению через базальную мембрану и мигрировать в другие части тела. Клетки должны быть в состоянии и выделяют протеазы, которые расщепляют базальной мембраны, а также миграцию, чтобы быть агрессивным. BD BioCoat опухолевой инвазии Система обеспечивает клетки с условиями, которые позволяют оценить их инвазивных собственности<em> В пробирке</em<sup> 1,2</sup>. Она состоит из BD Сокол FluoroBlok 24-многоямного Вставить Тарелка с 8,0 микрон размер пор мембраны ПЭТ, которая была равномерно покрыта BD Матригель Matrix. Этот равномерный слой BD Матригель Матрица служит восстановленный базальной мембраны<em> В пробирке</em> Предоставление истинной барьер для неинвазивного клетки, представляя соответствующую структуру белка для изучения вторжения. Покрытие процесс закрывает поры мембраны, блокируя неинвазивных клетки мигрируют через мембрану. В отличие от инвазивных клетки способны отделяться от и мигрируют через покрытые оболочкой. Количественный клеточного вторжения может быть достигнуто либо пре-и пост-клеточного вторжения маркировки с флуоресцентным красителем, таких как DiIC<sub> 12</sub> (3) или кальцеин AM, соответственно, и измерения флуоресценции вторжения в клетки. Так как мембрана BD FluoroBlok эффективно блокирует прохождение света от 490-700 нм при> 99% эффективности, флуоресцентно-меченых клеток, которые еще не вторглась не обнаруживаются снизу чтения флуоресценции читателя пластины. Однако клетки, которые вторглись на нижней мембраны уже не защищены от источника света и обнаружил с соответствующим читатель пластины. Это видео демонстрирует вторжения конечной точкой анализа клеточной, используя кальцеин утра до обнаружения вторжения клеток.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
BD BioCoat Tumor Invasion System | BD Biosciences | 354165 or 354166 | ||
HT-1080 and NIH/3T3 cells | ATCC | |||
Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM; serum-free) | ||||
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline, without calcium and magnesium (DPBS) | ||||
BD Falcon FluoroBlok 24-Multiwell Insert System to be used as a cell migration control | BD Biosciences | 351157 or 351158 | ||
5% Fetal Bovine Serum in DMEM | ||||
BD Calcein AM Fluorescent Dye | BD Biosciences | 354216 or 354217 | ||
Hanks’ Balanced Salt Solution (HBSS) | ||||
BD Falcon 24-well plates for post cell invasion labeling | BD Biosciences | 351147 | ||
Fluorescence plate reader with bottom reading capabilities | PerkinElmer EnVision (R), TECAN Infinite (R), Molecular Devices SpectraMax (R), BioTek Synergy (TM), BMG LABTECH PHERAstar. |