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Caracterização funcional do RING-Tipo E3 Ubiquitin Ligases In Vitro e In Planta
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Functional Characterization of RING-Type E3 Ubiquitin Ligases In Vitro and In Planta

Caracterização funcional do RING-Tipo E3 Ubiquitin Ligases In Vitro e In Planta

português

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10:27 min

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December 05, 2019

DOI:

10.3791/60533-v

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10.3791/60533-v

•

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December 05, 2019

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1Department of Entomology, Plant Pathology and Nematology,University of Idaho, 2Department of Plant Sciences,University of Idaho

Summary

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O objetivo deste manuscrito é apresentar um esboço para os estudos bioquímicos e funcionais abrangentes das ligaduras de ubiquitina ring-tipo E3. Este pipeline multipasso, com protocolos detalhados, valida uma atividade enzimática da proteína testada e demonstra como vincular a atividade à função.

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RING-type E3 Ubiquitin LigasesSite-directed MutagenesisIn Vitro Enzymatic ActivityIn Planta FunctionalityUbiquitination AssayRING DomainCys And His ResiduesPCRDpn1 DigestionPMAL-c2 VectorMBP TagSDS-PAGEPVDF MembraneWestern Blotting

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Kud, J., Wang, W., Yuan, Y., Caplan, A., Kuhl, J. C., Dandurand, L., Xiao, F. Functional Characterization of RING-Type E3 Ubiquitin Ligases In Vitro and In Planta. J. Vis. Exp. (154), e60533, doi:10.3791/60533 (2019).

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