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Expressão, purificação, cristalização e ensaios enzimáticos de proteínas contendo domínio de Fumarilacetoacetato de hidrolase
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Expression, Purification, Crystallization, and Enzyme Assays of Fumarylacetoacetate Hydrolase Domain-Containing Proteins

Expressão, purificação, cristalização e ensaios enzimáticos de proteínas contendo domínio de Fumarilacetoacetato de hidrolase

português

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10:21 min

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June 20, 2019

DOI:

10.3791/59729-v

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10.3791/59729-v

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June 20, 2019

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1Research Institute for Biomedical Aging Research,University of Innsbruck Austria, 2Center for Molecular Biosciences Innsbruck (CMBI),University of Innsbruck Austria, 3Division of Genetic Epidemiology,Medical University of Innsbruck Austria, 4Faculty of Chemistry, Department of Organic Chemistry,University of Vienna Austria

Summary

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Expressão e purificação de proteínas contendo domínio de fumarilacetoacetato hidrolase é descrita com exemplos (expressão em E. coli, FPLC). As proteínas purificadas são utilizadas para a cristalização e produção de anticorpos e empregadas para ensaios enzimáticos. Os ensaios fotométricos selecionados são apresentados para exibir a multifuncionalidade de FAHD1 como oxaloacetato descarboxilase e acylpyruvate hydrolase.

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ExpressionPurificationCrystallizationEnzyme AssaysFumarylacetoacetate HydrolaseFHD ProteinTCA CycleEnergy MetabolismMitochondriaCellular SenescenceIPTG InductionAffinity ChromatographyFPLCBL21-DE3 PLysS E. ColiLB AgarNZCYM Medium

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Weiss, A. K. H., Holzknecht, M., Cappuccio, E., Dorigatti, I., Kreidl, K., Naschberger, A., Rupp, B., Gstach, H., Jansen-Dürr, P. Expression, Purification, Crystallization, and Enzyme Assays of Fumarylacetoacetate Hydrolase Domain-Containing Proteins. J. Vis. Exp. (148), e59729, doi:10.3791/59729 (2019).

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