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Classificação negativa de neurônios por núcleos ativados por fluorescência combinada com sequenciamento de RNA de núcleos únicos para estudar o nicho neurogênico do hipocampo
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JoVE Journal Nörobilim
Fluorescence-Activated Nuclei Negative Sorting of Neurons Combined with Single Nuclei RNA Sequencing to Study the Hippocampal Neurogenic Niche

Classificação negativa de neurônios por núcleos ativados por fluorescência combinada com sequenciamento de RNA de núcleos únicos para estudar o nicho neurogênico do hipocampo

DOI:
10.3791/64369-v

•

08:16 min

•

October 20, 2022

•

, , , ,
1The Francis Crick Institute, 2MSD R&D Innovation Centre

Bölümler

  • 00:04Introduction
  • 01:08Dissection of the Dentate Gyrus (DG)
  • 01:53Tissue Dissociation, Single Nuclei Isolation, and Anti-NeuN Immunostaining
  • 04:03Fluorescence Activated Nuclei Sorting (FANS) to Exclude Neuronal Populations
  • 05:12Preparation of the Single Nuclei Suspension to Perform Single Nuclei RNA Sequencing
  • 05:59Results: Preparation of a Suspension of Non-Neuronal Single Nuclei Isolated from the Dentate Gyrus (DG)
  • 07:51Conclusion

Özet

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Apresentado aqui é um método para sequenciar núcleos únicos isolados do giro dentado do rato que exclui a maioria dos neurônios através da classificação de núcleos ativados por fluorescência (FAN). Essa abordagem gera perfis de expressão de alta qualidade e facilita o estudo da maioria dos outros tipos de células representadas no nicho, incluindo populações escassas, como células-tronco neurais.

Etiketler

Fluorescence-Activated Nuclei Negative SortingSingle Nuclei RNA SequencingHippocampal Neurogenic NicheNeural Stem CellsAstrocytesOligodendrocytesAdult Hippocampal NeurogenesisDentate GyrusBrain DissectionDounce HomogenizerNuclei SuspensionCell StrainerCentrifugation

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