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Purificación e identificación de proteínas específicas de tipo celular a partir de tejidos complejos utilizando una línea de ratón de ARNt sintetasa de metionina mutante
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Cell-Type Specific Protein Purification and Identification from Complex Tissues Using a Mutant Methionine tRNA Synthetase Mouse Line
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Purificación e identificación de proteínas específicas de tipo celular a partir de tejidos complejos utilizando una línea de ratón de ARNt sintetasa de metionina mutante

DOI:
10.3791/63713-v

•

07:39 min

•

April 13, 2022

•

, , , , , ,
1Max-Planck-Institute for Brain Research,Synaptic Plasticity Department, 2Biyokimya ve Moleküler Biyoloji Anabilim Dalı,Veterinary School, Complutense University of Madrid

Bölümler

  • 00:05Introduction
  • 00:40Tissue Harvesting, Lysis, and Protein Extraction
  • 03:03Protein Purification
  • 05:28Results: Cell-Type-Specific Protein Labeling with Azidonorleucine
  • 06:35Conclusion

Özet

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Este protocolo describe cómo realizar el marcado de proteínas específicas del tipo celular con azidonorleucina (ANL) utilizando una línea de ratón que expresa una sintetasa de ARNt de L274G-Metionina mutante (MetRS*) y los pasos necesarios para el aislamiento de proteínas específicas de tipo celular marcadas. Describimos dos posibles vías de administración de ANL en ratones vivos mediante (1) agua potable y (2) inyecciones intraperitoneales.

Etiketler

Cell-type SpecificProtein PurificationProtein IdentificationMutant Methionine TRNA SynthetaseCell Type Specific ProteinsIn VitroIn VivoImmunofluorescentAlkylationIodoacetamideBuffer ExchangeClick ChemistryAzidonorleucine IncorporationNeutravidin Binding

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