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Harzgestützte Erfassung in Verbindung mit isobarer Tandem-Massenmarkierung für eine multiplexige Quantifizierung der Proteinthioloxidation
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Resin-Assisted Capture Coupled with Isobaric Tandem Mass Tag Labeling for Multiplexed Quantification of Protein Thiol Oxidation
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Harzgestützte Erfassung in Verbindung mit isobarer Tandem-Massenmarkierung für eine multiplexige Quantifizierung der Proteinthioloxidation

DOI:
10.3791/62671-v

•

07:16 min

•

June 21, 2021

•

, , ,
1Integrative Omics, Biological Sciences Division,Pacific Northwest National Laboratory, 2Bioproducts Sciences and Engineering Laboratory, Department of Biological Systems Engineering,Washington State University

Bölümler

  • 00:04Introduction
  • 00:31Resin-Assisted Capture
  • 03:52On-Resin Tryptic Digestion and Tandem Mass Tag (TMT) Labeling
  • 04:45Peptide Elution
  • 05:47Results: Analysis of Peptides from Resin-Assisted Capture Enrichment
  • 06:35Conclusion

Özet

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Die Proteinthioloxidation hat unter normalen physiologischen und pathophysiologischen Bedingungen erhebliche Auswirkungen. Wir beschreiben die Details einer quantitativen Redox-Proteomik-Methode, die harzgestützten Einfang, isobare Markierung und Massenspektrometrie verwendet, um eine ortsspezifische Identifizierung und Quantifizierung von reversibel oxidierten Cysteinresten von Proteinen zu ermöglichen.

Etiketler

Protein Thiol OxidationResin-assisted CaptureIsobaric Tandem Mass Tag LabelingQuantificationCystine ResiduesSample PreparationAcetone WashProtein SolubilizationBCA AssayCentrifugal FiltrationProtein ReductionDTTBuffer Exchange

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