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Correção rápida in Vivo e isolamento de complexos translacionais de células eucarióticas
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Rapid In Vivo Fixation and Isolation of Translational Complexes from Eukaryotic Cells

Correção rápida in Vivo e isolamento de complexos translacionais de células eucarióticas

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•

14:29 min

•

December 25, 2021

DOI:

10.3791/62639-v

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10.3791/62639-v

•

14:29 min
December 25, 2021

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1Division of Genome Sciences and Cancer, The John Curtin School of Medical Research,The Australian National University, 2Centre for Advanced Microscopy,The Australian National University, 3Victor Chang Cardiac Research Institute

Özet

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Apresentamos uma técnica para estabilizar rapidamente complexos translacionais (biossíntese de proteínas) com formaldeído interligando em leveduras vivas e células mamíferas. A abordagem permite dissecar intermediários transitórios e interações dinâmicas de RNA:protein. Os complexos interligados podem ser usados em vários aplicativos a jusante, como em métodos de perfil baseados em sequenciamento profundo, microscopia e espectrometria de massa.

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In Vivo FixationTranslational ComplexesEukaryotic CellsRapid ChillingFormaldehyde FixationGlycine QuenchingCell LysisRibosomal FractionsAffinity PurificationRNA AnalysisMass SpectrometryYeast CultureExponential Growth PhaseFormaldehyde ConcentrationFixation TimeCell PelletingGlycine Buffer

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Janapala, Y., Woodward, K., Lee, J., Rug, M., Preiss, T., Shirokikh, N. E. Rapid In Vivo Fixation and Isolation of Translational Complexes from Eukaryotic Cells. J. Vis. Exp. (178), e62639, doi:10.3791/62639 (2021).

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