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Dépistage stratégique et caractérisation du complexe de signalisation des protéines VISUAL GPCR-mini-G pour une cristallisation réussie
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Strategic Screening and Characterization of the Visual GPCR-mini-G Protein Signaling Complex for Successful Crystallization
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Dépistage stratégique et caractérisation du complexe de signalisation des protéines VISUAL GPCR-mini-G pour une cristallisation réussie

6,683 Views

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09:19 min

•

March 16, 2020

DOI:

10.3791/60747-v

DOI:
10.3791/60747-v

•

09:19 min
March 16, 2020

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1Laboratory of Biomolecular Research,Paul Scherrer Institute, 2Biyoloji Bölümü,ETH Zürich, 3Center for Radiopharmaceutical Sciences,Paul Scherrer Institute, 4Laboratory of Molecular Biology,Medical Research Council

Özet

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Ce rapport décrit le dépistage de différents détergents pour la préparation du GPCR visuel, de la rhodopsine et de son complexe avec mini-Go. Des méthodes biochimiques caractérisant la qualité du complexe à différents stades de purification sont démontrées. Ce protocole peut être généralisé à d’autres complexes de protéines membranaires pour leurs futures études structurelles.

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GPCRMini-G ProteinSignal TransductionMembrane Protein ComplexDetergent ScreeningCrystallizationHEK293 CellsAffinity Purification9-cis RetinalBuffer Exchange

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Pamula, F., Mühle, J., Blanc, A., Nehmé, R., Edwards, P. C., Tate, C. G., Tsai, C. Strategic Screening and Characterization of the Visual GPCR-mini-G Protein Signaling Complex for Successful Crystallization. J. Vis. Exp. (157), e60747, doi:10.3791/60747 (2020).

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