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Identificação de parceiros de proteína Interagir utilizando Tandem purificação por afinidade
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JoVE Journal Biyoloji
Identification of Protein Interacting Partners Using Tandem Affinity Purification

Identificação de parceiros de proteína Interagir utilizando Tandem purificação por afinidade

DOI:
10.3791/3643-v

•

10:02 min

•

February 25, 2012

•

, , ,
1Section of Virology, Department of Medicine,Imperial College London

Bölümler

  • 00:05Başlık
  • 01:30Transfection
  • 02:20Cell Lysis
  • 03:30Binding to Rabbit IgG-agarose
  • 04:53TEV Protease Cleavage
  • 05:48Binding to Immobilized Streptavidin Beads
  • 07:50Biotin Elution of the Streptavidin Binging Peptide and Bait Protein

Özet

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Tandem purificação por afinidade é uma abordagem robusta para a identificação de parceiros de ligação às proteínas. Como prova de conceito, este método foi aplicado ao bem caracterizado eIF4E factor de iniciação da tradução para o co-precipitado os factores de células hospedeiras envolvido na iniciação da tradução. Este método é facilmente adaptado a qualquer proteína celular ou virai.

Etiketler

Protein Interacting PartnersTandem Affinity PurificationIdentification Of Interacting ProteinsYeast Two Hybrid SystemPull Down AssaysImmunoprecipitationMass Spectrometry IdentificationDouble-affinity Tag Mediated PurificationTAPEukaryotic Translation Initiation Factor EIF4ECellular Translation Factor EIF4EEIF4F ComplexCap-dependent Translation InitiationProtein G UnitsStreptavidin Binding PeptideTobacco Etch Virus (TEV) Protease Cleavage Sequence

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