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Individuazione di partner proteine ​​interagenti mediante Tandem Affinity Purification
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Identification of Protein Interacting Partners Using Tandem Affinity Purification
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Individuazione di partner proteine ​​interagenti mediante Tandem Affinity Purification

DOI:
10.3791/3643-v

•

10:02 min

•

February 25, 2012

•

, , ,
1Section of Virology, Department of Medicine,Imperial College London

Bölümler

  • 00:05Başlık
  • 01:30Transfection
  • 02:20Cell Lysis
  • 03:30Binding to Rabbit IgG-agarose
  • 04:53TEV Protease Cleavage
  • 05:48Binding to Immobilized Streptavidin Beads
  • 07:50Biotin Elution of the Streptavidin Binging Peptide and Bait Protein

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Tandem purificazione per affinità è un valido approccio per l'individuazione di partner di legame proteico. Come prova di concetto, questa metodologia è stata applicata al ben caratterizzato eIF4E fattore di inizio traduzione di co-precipitato i fattori coinvolti in cellule ospiti di inizio di traduzione. Questo metodo è facilmente adattabile a qualsiasi proteina cellulare o virale.

Etiketler

Protein Interacting PartnersTandem Affinity PurificationIdentification Of Interacting ProteinsYeast Two Hybrid SystemPull Down AssaysImmunoprecipitationMass Spectrometry IdentificationDouble-affinity Tag Mediated PurificationTAPEukaryotic Translation Initiation Factor EIF4ECellular Translation Factor EIF4EEIF4F ComplexCap-dependent Translation InitiationProtein G UnitsStreptavidin Binding PeptideTobacco Etch Virus (TEV) Protease Cleavage Sequence

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