この論文では、下部双翅目バエ Bradysia(Sciara)coprophilaの実験室のメンテナンス(交配と摂食を含む)について概説します。
下部双翅目バエ、 Bradysia(Sciara)coprophilaの 実験室のストックは、1世紀以上にわたって維持されてきました。 B. coprophila の実験室維持のためのプロトコルは、ここに提示されています。これらのプロトコルは、 B. coprophila を研究する急速に増加する研究室が、(1)男性の減数分裂Iの単極性紡錘体を含む、そのユニークな生物学的特徴を活用するのに役立ちます。(2)男性減数分裂IIにおけるXダイアドの非分離。(3)母方と父方の同族体を区別するための染色体インプリンティング。(4)生殖細胞系限定(L)染色体;(5)染色体の消失(男性の減数分裂Iの父方染色体;初期胚の1〜2本のX染色体;初期胚の体細胞からのL染色体);(6)母親による性別決定(Y染色体はありません)。(7)幼虫の唾液腺ポリテン染色体のDNAパフ遺伝子座での発達的に調節されたDNA増幅。
近年の B. coprophila ゲノムのシーケンシングとアセンブルの進歩、およびゲノム工学のための形質転換方法論の開発を利用することで、染色体力学のこれらの多くのユニークな特徴を探求することが可能になりました。 研究にB. coprophila を使用する成長中の科学コミュニティは、ハエの交配(息子のみまたは娘のみを持つ母親の表現型マーカー、生化学実験のための大量交配の詳細)、胚のハッチのチェック、幼虫の給餌、およびその飼育に関するその他のコメントについて、ここで説明したプロトコルの恩恵を受けることができます。
生物学的原理を完全に理解するには、生命の樹にまたがる多くの多様な生物の研究が必要です。19世紀 末までは幅広い生物が記載されていたが、20世紀 半ばまでに実験的研究は一握りのモデル生物に限られるようになった。ゲノム時代の到来と、Tree of Life1の全種のゲノム配列決定が目標となった今、私たちは実験室での実験に用いる生物の種類を拡大し、その多様性を享受する立場にあります。このような実験用モデル生物の新規化には、実験室で維持管理できることが前提となります。ここでは、そのような新興の新旧モデル生物を飼育するためのプロトコルについて説明します。
地球上の動物生活の大部分は、昆虫2の4つの超放射線によって占められています。昆虫の中には、約158,000種の双翅目(真のハエ)3があり、約3000種がSciaridae科(黒カビのブヨ)4です。ショウジョウバエは、双翅目バエの中で最も徹底的に研究されています。下半双翅目バエ(Nematocera)、Bradysia(以前はSciaraと呼ばれていた)coprophilaは、2億年前に「高等双翅目」ハエ(Brachycera)であるショウジョウバエから分岐しました。したがって、B. coprophilaは、D. melanogasterとの比較研究において分類学的に有利な位置にあります(図1)。さらに、B. coprophilaは、それ自体が研究に値する多くのユニークな生物学的特徴を持っています5,6,7。これらの特徴の多くは、生物のすべての細胞が同じDNA含有量を持つというDNA恒常性の法則に反しています。B. coprophilaでは、(i)父方のゲノムは、男性の減数分裂Iの単極性紡錘体で排除されます。(ii)男性の減数分裂IIではXダイアドの非分離があります。(iii)生殖細胞系限定の(L)染色体が体細胞から排除されます。(iv)初期胚では、個人の性別に応じて1つまたは2つのX染色体が排除されます。母方と父方の同族体を区別するための染色体インプリンティングは、B. coprophilaで最初に発見され、これらの染色体除去イベントの多くに作用しています。染色体の除去に加えて、DNA恒常性の別のバイパスは、幼虫の唾液腺ポリテン染色体のDNAパフ遺伝子座での発達的に制御された遺伝子座特異的DNA増幅を介して発生します。これらのユニークな特徴の研究には、B.coprophilaの実験室でのメンテナンスが必要です。その畜産の詳細は、そのような研究を容易にするためにここに提示されています。
図1: Bradysia(Sciara)coprophilaの系統発生。 一般的なモデル生物は青のフォントで示され、分類学的順序は赤のフォントで示されています。 Bradysia および他のSciarid菌のブヨ、および蚊は低ジプテランバエ(以前はNematocera亜目)ですが、 ショウジョウバ エ種は高二翅目バエ(亜目:Brachysera)です。図の左側の情報は、Misof et al.33からのものです。右側の情報は、Bertone et al.34 と Wiegmann et al.2 からのものです。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
以前は、Sciara属は真核生物の中で最も多くの種(700種)を持っていたため、ステファンはそれらを8つ細分化しました。その後、シンは、Sciaridae科をSciarinae亜科(Sciara、Trichosia、Leptosciarellaを含む6属)、Megalosphyinae亜科(Bradysia属を含む)、およびその他の3つのグループ(Pseudolycoriellaを含む)に細分化することを提案しました9。Sciaridaeの系統発生は、近年、いくつかのグループによってさらに研究されています9,10,11。過去数十年にわたって、Sciaridae科の多くの生物の名前が変更されました12。1世紀以上にわたる文献のほとんどは、私たちが研究している生物をSciara coprophilaと呼んでいますが、現在の分類学上の名前はBradysia coprophila(syn. Bradysia tilicolaおよびその他の同義語)10です。それらは世界中で見られ、キノコや他の菌類を食べるため、一般に真菌ブヨとして知られています。それらは、1804年にヨーロッパのMeigen13によって最初に記載され、その後、北アメリカのJohannsen 14,15によって記載されました。コプロフィラ菌はコールドスプリングハーバー研究所で採集され、1900年代初頭にチャールズ・メッツがコロンビア大学の大学院生だったトーマス・ハント・モーガンとともに研究所のストックを確立しました。したがって、現在の株は近親交配の世紀を反映しています。同様に、B. coprophilaの生物学は、Helen Crouse(Barbara McClintockと博士号を取得した)による数十年にわたる細胞遺伝学的研究によってさらに解明されました。
1930年代、Bradysia(Sciara)は、遺伝研究のモデルシステムとしてDrosophila melanogasterと競争しました。その多くのユニークな生物学的特徴にもかかわらず、B. coprophilaは、放射線誘発性の表現型突然変異が遺伝研究に必要であり、B. cophilaがD. melanogasterよりもガンマ線照射に対してわずかに耐性が高いにもかかわらず、後者で達成するのが容易であったため、人気のあるモデル生物としてD. melanogasterに凌駕されました16。ゲノミクスの現代では、これはもはや問題ではありません。近年、B. coprophilaのゲノム配列17,18,19(Urban、Gerbi、Spradling、データは示さず)や形質転換法20,21(Yamamoto and Gerbi、データは示さず)が利用可能になったため、新旧の新興モデルシステムとして活用する機が熟してきたこと、また、この研究に採用する科学者コミュニティが増えていることからも明らかです。この記事では、ラボのメンテナンスの手順について説明します。
B. coprophilaはY染色体を欠いており、子孫の性別は母親によって決定されます。X'(「Xプライム」)染色体を持ち、パラセントリックな反転が長い女性には娘しかいませんが、標準(非反転)X染色体にホモ接合性の女性には息子しかいません5(図2)。X’染色体19の配列情報は入手可能ですが、X’染色体がどのようにして子孫を雌と決定するのかについては、まだ分子メカニズムが解明されていません。男性はX’染色体を持つことはなく、受精後、女性はX’X(X’のヘテロ接合体)またはXXになります。成体のX’X雌は、翅の表現型マーカーによってXX雌と区別できます(図3)。X’Xの女性(娘のみを持つ)は、X’の支配的な波状(W)ウィングマーカーによって認識できます(HoLo2ストックのように)22。あるいは、XXの女性(息子のみを持つ)は、91Sストック23のように、Xの劣性プチ(p)ウィングマーカーで認識できます。この場合、X’Expの女性はフルレングスの(小柄ではない)翼を持ち、娘だけを持ちます。ストック6980は、X染色体上の腫脹(sw)静脈24の劣性マーカーと、X’上の優勢マーカーWavyを運び、クロスの選択のための2つのマーカーを可能にします。Wavyの発現の程度はさまざまで、食品が制限されている過密状態のバイアルや温度が高すぎると弱くなるように見えます。波状の翼の表現型は、幼虫が通常の21°Cではなく冷蔵室(4°-8°C)に保管されている場合、非常に強力です。 劣性プチウィングマーカーは変動せず、非常に簡単に識別できますが、91SストックはHoLo2ストックよりも健康状態が悪いため、使用頻度が低くなります。B. coprophilaの交配スキームをここに示し(図2)、HoLo2、7298、W14株(Supplemental File 1)、91S株(Supplemental File 1)、6980株(Supplemental File 1)、および転座株(Supplemental File 1)について詳細に説明しています。転座ストックはもはや存在しません。これらは、リボソームRNA遺伝子25,26,27を含むXの短腕上のヘテロ染色体(H1、H2、およびH3)の相互転座であった。
図2: B. coprophilaの交配スキーム。 この生物はY染色体を持っていません(男性の体細胞は単一のXを持っています)。母親は自分の子孫の性別を決定します。XXの母親には息子しかおらず、X’Xの女性には娘しかいません。X’染色体は、X染色体と比較すると、長いパラセントリック反転を持っています。この図では、X染色体(またはX ‘)染色体の父方または母方の系統は、それぞれ青または赤で示されます。精子は常染色体にとって一倍体ですが、減数分裂IIの非分離のためにX染色体の2つのコピーを持っています。初期胚の体細胞系譜は、父方から派生したXの1つまたは2つのコピーを、それぞれ女性または男性である場合に排除します。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図3: B.coprophilaの翼表現型。 成虫の雌のハエは、さまざまな翼の表現型で示されています:(A)まっすぐな翼(XX)、(B)波状の翼(X’WX)、(C)極端な波状の翼(X’WX)冷たいroo mに幼虫を保存した後にしなびた外観を持つ表現型、 (D)痕跡のような小柄な翼(XpXp)、(E)野生型(XX)で腫れていない静脈のないまっすぐな翼、 (F)翼の上端および/または両翼の先端近くに小さな泡(黒い矢印)が現れる静脈が腫れた直線翼(XswXsw)、(G)片方または両方の翼に水ぶくれ(白い矢印)が発生する腫れの極端な例。男性はX’染色体を欠いているため、波状の翼を持つことはありませんが、91S株または6980株ではそれぞれ小柄または腫れた翼があります。スケールバー = 1 mm。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
ストックメンテナンスの目標は、交配の半分が雌の生産母親からの交配であり、半分が雄の生産母親からの交配である交配を行い、次の世代で次の世代の女性と男性の成人の数が等しいようにすることです。ただし、男性のライフサイクルは女性よりも短く、成人男性は成人女性の最大1週間前に出現するため、これには計画も含まれます。自然は、オスの胚が同じ日に交配からメスの幼虫の1〜2日後に幼虫として出現することで、この男女間の非同期性に対応します。しかし、雄と雌の成虫が同時に実験室交配に利用できるようにするために、雌の幼虫の入ったバイアルを室温ではなく室温に置いておくか、雄の幼虫の入ったバイアルをわずかに低い温度(例えば、16°C)に置くことで、雌の発育をいくらか早めることができます。より確実な別のルートは、月曜日に女性生産者の母親と交配を行い、同じ週の金曜日に男性生産者の母親と交配することです。最も簡単なルートは、私たちが採用していることですが、毎週同じ日に女性生産者と男性生産者の母親と交配を行い、連続した週ごとにその日に交配を行うことです。このアプローチでは、1週目の交配から生まれた成体の雌を、2週目の交配から出てきた成体の雄と交配させることができます。
雌 のB. coprophila のライフサイクルは、21°Cで飼育した場合、5週間です(表1)。彼らのライフサイクルの長さは、低温または栄養不足の場合にやや長くなります。オスのB. coprophila のライフサイクルは、メスより0.5-1週間早く蛹になるため、4~4.5週間です。各幼虫のインスターの終わりは、ステロイドホルモンのエクジソンレベルのバーストによって引き起こされるキューティクルの脱落によって特徴付けられます。3つの幼虫の幼虫を持つ D.melanogaster とは異なり、 B.coprophilaは 4つの幼虫の幼虫を持っています。
発達段階 | 交配後日数(dpm) | ステージの長さ(日数) |
産卵 | 1-2 | |
胚 | 1-2 から 7-8 | ~7日間 |
幼虫 | ||
幼虫のインスター1、2、および3 | 7-8 から 16-19 | ~10 |
4番目の幼虫のインスタープレアイスポット | 16-19 から 21-24 | 5 |
第4幼虫のインスターアイスポットステージ | 21-24 から 25-28 まで | 4 |
蛹 | 25-28 から 30-33 | 5 |
大人 | 交配した場合は21°Cで1〜2日生存し、交配しない場合は16°Cで2〜3週間生存します。 |
表1:21°Cでの雌 のB.coprophila のライフサイクル。
B. coprophila は、15°C〜25°Cの範囲のどこにでも保持でき、低温では開発がゆっくりと進行します。この昆虫は湿気の多い環境(観葉植物やキノコの床の土壌に見られる)を好むので、インキュベーター内に脱イオン水を入れたビーカーを保管しています。 B. coprophila は、蓋がゆるくフィットし、ビーカーの水が入った金属製のパン箱に室温で保管できますが、37°C28でヒートショックに陥り、暑い気候では危険です。マイケル・アッシュバーナー氏らは、在庫管理に必要な時間を短縮するために、 D. melanogaster を寒さの中で保存しようと試みましたが、ほとんど成功しませんでした。対照的に、 B. coprophila の主な利点は、中期の幼虫の入ったバイアルを、月に1回だけ給餌するという最小限の手入れで、冷蔵室(4〜8°C)のオープンシェルフに最大3か月間保存できることです。彼らは蛹の段階までの寒さで非常にゆっくりと成長し、バイアルが21°Cに戻されると肥沃な成体として出現します。 おそらく、これは野生での越冬を模倣しています。この寒さによる発育失速は、中期の B. coprophila 幼虫16のガンマ線照射後に見られるものに匹敵するかもしれませんが、正常な発育進行のために戻れないポイントを過ぎた後期幼虫には発生失速は見られません。
ここで紹介した B. coprophila の飼育に関するプロトコルは、この生物を研究室で飼育し、そのユニークな生物学的特徴を探求するための実験を行いたいと考えている科学者にとって有用です。 B. coprophila29 を維持するために寒天ベースに振りかけた酵母とキノコ粉末を使用した給餌方法の最初の説明は、メスの研究室で14種類のSciarid Flys5を飼育するために使用されました。その後、イラクサおよび/またはほうれん草の粉末の添加により、 B. coprophila (Gabrusewycz-Garcia、私信)の活力がさらに増加することが観察されました。これらの方法は、現在培養されている Bradysia impatiens や Lycoriella ingenua など、Sciaridae科の関連種の維持に成功しています(Robert Baird、私信)。
他の方法(以下で説明する代替給餌方法など)は 、B. coprophilaを飼育するために試みられてきましたが、ここで説明するプロトコルは、寒天の表面積あたりの幼虫の最も好ましい比率を持つように最適化されており、最も肥沃な脂肪の成虫を取得し、カビの成長を最小限に抑えています。スケールアップするために、上記のプロトコル2で説明したように、ガラスバイアル中で大量交配を行うことができます。あるいは、数匹(2〜4匹)の成体女性を、 ショウジョウバエ を育てるために使用されるフラスコ(使い捨て6オンス= 177.4 mL角底 ショウジョウバエ ポリプロピレンボトル)に2倍の成人男性と一緒に配置することができます。どちらの場合も、研究者は、フラスコにすべての女性生産者またはすべての男性生産者の母親のみが含まれていることを完全に確信している必要があります。
蛹と成虫は食べないので、幼虫だけに餌を与えます。幼虫が蛹に変わった場合は、バイアルに餌を与えないでください(これの兆候は、最初に出現する成虫のハエが現れるときです)。成虫が閉じたら、バイアルを冷たいインキュベーター(利用可能な場合は16°Cなど)に入れます。週に3回(例:月曜日、水曜日、金曜日)給餌し、幼虫が年をとるにつれてバイアルごとに与えられる食物の量を増やします。たっぷりと餌を与えれば、太った肥沃な大人が報われるでしょう。ただし、餌を与えすぎると白いカビが現れ、それはバイアルに堆積する食物の量を減らすための兆候です。さらに、餌を与えすぎると、寒天の上に厚い食物のパッドが発達し、成虫が出現しにくくなります(鉗子でパッドを取り外すことができますが、パッドで幼虫を外に出さないように注意してください-これをまったく行わなくてもよいのが最善です)。幼虫が少ない(「少数」とマークされている)バイアルは、必要な食物が少なくて済みます。餌が少なすぎると、幼虫は餌を求めてバイアルの壁を登ります。栄養不足の幼虫は、繁殖力の低い小さな成虫をもたらします。
代替給餌方法
幼虫に週に3回ではなく、幼虫の段階で1回だけ餌を与えるために、さまざまな方法が試みられてきました。B.コプロフィラはショウジョウバエスタイルの食品では成長しません。ジョン・アーバン(私信)は、寒天にB.コプロフィラ食品を混ぜようとしましたが、カビが生えすぎました。彼は、2つのカビ防止剤(テゴセプトとプロピオン酸)を組み合わせて別々に追加し、いくつかの異なる濃度を試したところ、カビを抑制するレベルでB.coprophilaに対してすべて毒性があることを発見しました。寒天は、B. coprophilaが酸性pH(プロピアン酸と同様)で病気になるため、pH 6-7(中性)である必要があります。あるいは、週3回の給餌をなくすために、針のないヘラまたは注射器を使用して、交尾後1週間後(つまり、幼虫が出現し始める頃)に、各バイアルの寒天の上に濃厚な酵母ペースト(Red Star活性乾燥酵母を少量の蒸留水と混合して湿らせます)を分注しようとしました。
週3回の給餌を避ける別の方法は、各バイアルに菌類の生きた培養物を追加することです。Bath and Sponsler37 は、Sabouraudの培地を使用した傾斜した寒天表面に、 Chaetoconidia 属(最高)または Baplosporangia 属または Xllescheria属の真菌培養物で縞模様を付ける必要があると報告しました。この菌は 、B. coprophila が導入される数日から1週間前に栽培されました。この後、給餌は必要ありませんでした。この方法の変形は、Ellen Rasch(私信)によっても採用されました。私たちの手では、この方法ではバイアルが濡れすぎており、幼虫は溺れてしまいましたが、生きた真菌のバイアルに対して幼虫の数を最適化するために再度試すことができました。
Arthur Forer(私信)は、ツルバエ38と同じようにB.coprophilaを飼育することに成功しています。このアプローチにより、蛹は湿った張り子で育てられました。その後、成虫を交配させ、卵を新鮮で湿った張り子に置きました。得られた幼虫は、ペトリ皿の張り子に乗せられ、週に2回、イラクサの葉の粉末を与えられました。蛹はケージに入れられ、サイクルが繰り返されました。
山下由紀子さん(私信)は、自然界の鉢植えや湿度の高い温室など、自然界で見られる条件を模倣して、B. coprophilaを土壌で飼育しようと試みましたが、成功しませんでした。しかし、湿度が上がるとカビが問題になることがあります。それにもかかわらず、湿った土壌は、湿った土壌でプラスチックの箱にPseudolycoriella(以前はBradysia)の衛生的な幼虫を育てるために成功裏に使用されてきました。それらは分解されたIlex paraguariensisの葉を与えられ、1.2%酵母抽出物、1.4%コーンスターチ、0.8%オートミール粉、1.2%寒天12を幼虫の後期に補われます。同様に、湿った土壌は、砕いたインゲン豆を湿らせたピートモスに置き換えて、シャリドバエ39,40を育てることができます。
ブラディシアの実験室培養を維持するために、さらに他の方法が採用されてきました:(i)酵母と乾燥血液肥料が添加されたオートクレーブされたジャガイモ41;(ii)乾燥血液45を加えることができる肥料42,43,44;(iii)綿パッドと湿らせたペーパータオル付きのプラスチック容器、挽いた大豆46。
ダニ
ダニはショウジョウバエからB.コプロフィラに移すことができます。これを最小限に抑えるには、B. coprophilaをショウジョウバエのストックの近くではなく、別のインキュベーターまたは部屋に保管するのが最善です。さらに、ショウジョウバエを取り扱う前に、その日の早い時間にB.コプロフィラのメンテナンス作業を行ってください。ダニは観葉植物からB.coprophilaに移すこともできるため、植物をB.coprophilaと同じ部屋に保管しないでください。ダニがバイアルに侵入すると、B. coprophilaの体を這う小さな白い球状の生物として見ることができます。ショウジョウバエのダニを破壊する働きをする化学処理は、化学物質がB.コプロフィラを殺すため、B.コプロフィラには使用できません(B.コプロフィラはフェノールなどの有機ガスにも敏感です)。B. coprophila株のダニを駆除する唯一の治療法は、寒天プレート上の胚を手動で収集し、それぞれにダニがいないかどうかを調べ、細い絵筆を使用してそれらを新鮮な寒天バイアルに移すことです。綿入りガーゼプラグと酢酸セルロースフォームフラッグ(ショウジョウバエポリプロピレンバイアルに使用)は、どちらもバイアルへのダニの侵入を防ぐのに役立ちます。
飼育プロトコルの有用性
ここで説明するプロトコルにより、成長を続ける科学者のコミュニティは、 B. coprophila を新旧の新興モデル生物として飼育し、そのユニークな生物学的特徴を研究することができます。新しい研究室グループは、 Bradysia (Sciara)のユニークな生物学的特徴を維持し、調査するために、成長するコミュニティに参加することが奨励されています。
The authors have nothing to disclose.
飼育プロトコルの微調整にご協力いただいた過去の B. coprophila ストックキーパー(Jacob E. Bliss、Paula Bonazinga、Anne W. Kerrebrock、Ingrid M. Mercer、Heidi S. Smith)および研究関係者(特にRobert Baird、Michael S. Foulk、Donna Kubai、John M. Urban、Yutaka Yamamoto)に感謝します。 B. coprophila のケアに関する最初の指示は、Helen V. Crouse、Natalia Gabrusewycz-Garcia、Reba M. Goodman、Charles W. Metz、およびEllen Raschによって提供されました。山下由紀子さんとアン・W・ケレブロックさん、 Bradysia (Sciara)ストックセンターを引き受けてくださったことに感謝します。図の作成にご協力いただいたBrian Wiegmann氏(図1)、John M. Urban氏(図4 上段)、Laura Ross氏(図4 下段)、Yutaka Yamamoto氏(図5 左面)、門田Leo氏(図7 、 図8)に心より感謝申し上げます。写真撮影と撮影に協力してくれたAva Filis氏とBrown University Multidisciplinary Laboratoryに感謝します。この原稿にコメントをくださったRobert Bairdに感謝します。 私たちの 研究と維持管理は、NIHとNSFの支援を受けており、最近ではNIH GM121455からS.A.G.への支援を受けています。 B. coprophila の詳細については、現在建設中の Bradysia (Sciara)ストックセンターのウェブサイト(https://sites.brown.edu/sciara/ および https://sciara.wi.mit.edu)をご覧ください。
Agar (bacteriological) | U.S. Biological | A0930 | https://www.usbio.net; |
CO2 FlyStuff Foot Pedal | Genesee Scientific | 59-121 | |
CO2 FlyStuff Blowgun | Genesee Scientific | 54-104 | |
CO2 FlyStuff UltimaterFlypad | Genesee Scientific | 59-172 | https://www.geneseesci.com |
Ether fume hood | Labconco | 3955220 | Sits on top of lab bench |
Filter replacement cat # 6961300 | |||
Food: Brewer’s Yeast Powder | Solgar | Obtain from Amazon or health food store | |
https://www.solgar.com; | |||
Food: Nettle Powder (pesticide free) | Starwest Botanicals | 209460-51 | |
Food: Shitake Mushrooms (pesticide free) | Starwest Botanicals | 202127-5 | https://www.starwest-botanicals.com; |
Food: Spinach Powder ( pesticide free) | Starwest Botanicals | 209583-5 | |
Food: Straw (pesticide free ) | Starwest Botanicals | 209465-3 | |
Jar: clear glass, polypropylene lid | Fisher Scientific: | FB02911765 | 73 mm dia, 89 mm ht (240 ml) https://www.fishersci.com; |
Needle Probe, wooden handle | US Geo Supply Inc | SKU: 4190 | 5.75” long probe, stainless steel needle https://usgeosupply.com; (970)-434-3708 |
Vials: glass, preferred: | Wilmad LabGlass | ||
Wilmad-glass custom vials | 28-33 mm inner dia, 33 mm outer dia, 9.5 cm ht Wilmad: https://www.SP-WilmadLabglass.com |
||
Vials: glass (cheaper and ok) | Fisher Scientific | 03-339-26H | 29 mm outer dia, 9.5 cm h https://www.fishersci.com; |
Vials: glass (a bit narrow) | Genesee Scientific | 32-201 | 24.5 mm outer dia,9.5 cm h thttps://www.geneseesci.com |
Vials: polypropylene | Genesee Scientific | 32-114 | 28.5 mm outer dia,9.5 cm ht |
Vial Plugs | |||
roll of non-absorbent cotton | Fisher Scientific | 22-456881 | |
cheesecloth | Fisher Scientific | 22-055053 | https://www.fishersci.com; |