Tracking Sugar-Elicited Local Searching Behavior in <i>Drosophila</i>

Manal Shakeel; Shivam Kaushik; Teiichi Tanimura; Axel Brockmann; Pinky Kain

doi:10.3791/65955

JoVE Journal > Behavior

Davranış

Rastreando o comportamento de busca local provocado pelo açúcar em Drosophila

Published: November 17, 2023

doi:

10.3791/65955

Manal Shakeel^1,2, Shivam Kaushik³, Teiichi Tanimura⁴, Axel Brockmann¹, Pinky Kain^3,5

¹National Centre for Biological Sciences, ²The University of Trans-Disciplinary Health Sciences and Technology, ³Regional Centre for Biotechnology, ⁴Neural Circuit Group, Division of Biological Science, Graduate School of Science,Nagoya University, ⁵Perelman School of Medicine,University of Pennsylvania

Özet

Este protocolo descreve um ensaio comportamental para registrar o comportamento de busca provocado por açúcar usando Drosophila melanogaster. O ensaio pode ser utilizado para estudar comportamentos relacionados à alimentação e ao forrageamento, bem como os mecanismos neuronais subjacentes.

Abstract

O comportamento de forrageamento é essencial para a sobrevivência dos organismos, pois permite que eles localizem e adquiram recursos alimentares essenciais. Em Drosophila, a fome desencadeia um comportamento de busca distinto após o consumo de pequenas quantidades de uma solução de açúcar. Este relato apresenta uma configuração experimental simples para estudar o comportamento de busca provocado por açúcar com o objetivo de descobrir os mecanismos subjacentes. Quantidades diminutas de solução concentrada de açúcar provocam comportamento de busca sustentado em moscas. O envolvimento da integração de caminhos nesse comportamento tem sido estabelecido, uma vez que as moscas utilizam sua trajetória para retornar ao local do açúcar. Os achados mais recentes fornecem evidências de modulação temporal no início e intensidade do comportamento de busca após o consumo de açúcar. Também utilizamos essa configuração para ativação artificial de neurônios receptores do paladar específicos na faringe, o que provoca o comportamento de busca. O kit de ferramentas neurogenéticas Drosophila oferece uma gama diversificada de ferramentas e técnicas que podem ser combinadas com o paradigma do comportamento de busca provocado pelo açúcar para estudar os mecanismos neurais e genéticos subjacentes ao forrageamento. A compreensão da base neural do comportamento de busca impulsionado pela fome em moscas contribui para o campo da neurobiologia como um todo, oferecendo insights sobre os mecanismos regulatórios que governam os comportamentos alimentares não apenas em outros organismos, mas também em humanos.

Introduction

O comportamento de busca de alimento e forrageamento é uma estratégia fundamental de sobrevivência exibida por organismos em todos os táxons. Dois tipos de comportamentos de forrageamento têm sido identificados em insetos: busca de alimento induzida pela fome e busca local pós-refeição¹. Quando estão com fome, os insetos dependem de pistas sensoriais para localizar fontes de alimento. Ao encontrar e consumir uma pequena mancha de comida, eles iniciam um comportamento de busca local caracterizado por caminhos complicados e circulando em torno do local do alimento.

O comportamento de busca provocado pelo açúcar, uma forma particular de busca local, foi estudado pela primeira vez há mais de 60 anos, pelo biólogo americano Vincent Dethier em moscas-varejeiras². Quando passam fome, as moscas são apresentadas com uma pequena quantidade de açúcar de tal forma que não as saciam, elas começam uma busca local. O comportamento típico de busca é caracterizado por uma caminhada altamente tortuosa com baixa locomotricidade e alta taxa de giro e fazendo retornos ao local da queda de açúcar. Estudos subsequentes investigaram esse comportamento em moscas-domésticas e moscas-das-frutas ^3,4. O início, a intensidade e a duração da busca são regulados pelo estado interno do animal (por exemplo, privação e motivação), bem como por fatores externos, como disponibilidade e qualidade dos recursos ^1,5,6.

Os avanços nas tecnologias de rastreamento forneceram aos pesquisadores ferramentas valiosas para capturar e analisar o comportamento dentro de arenas controladas. Aqui, apresentamos um paradigma comportamental para rastrear moscas que caminham livremente após a ingestão de açúcar. Esta configuração simples permite o estudo do comportamento de busca provocada por açúcar em Drosophila , capturando e analisando o movimento da mosca em resposta à solução concentrada de açúcar fornecida em uma arena. Empregando tecnologia avançada de rastreamento e técnicas de análise de dados, os padrões locomotores, a exploração espacial e a dinâmica de resposta a estímulos açucarados foram quantificados com sucesso.

Com esse ensaio, foi demonstrado experimentalmente que a busca provocada por açúcar envolve o uso de integração de caminhos e pode ser separada espacialmente temporalmente do consumo de açúcar ^7,8. Além disso, tem sido demonstrado que o comportamento pode ser desencadeado pela ativação de neurônios do paladar^faríngeo9. Resultados recentes mostram que o estímulo açucarado não é um mecanismo de liberação inato, mas também modulatório, e controla o início do comportamento temporalmente⁸. Utilizando esse paradigma, também estudamos esse comportamento em abelhas melíferas (Apis mellifera)^7,8.

O objetivo final desta pesquisa é desvendar circuitos neurais e novos componentes genéticos envolvidos na regulação do comportamento de busca através de manipulações genéticas direcionadas e técnicas de neuroimagem. Comportamentos de busca de alimentos têm se mostrado paradigmas experimentais altamente eficazes para o estudo da navegação e memória espacial em insetos. Esses comportamentos fornecem uma oportunidade única para investigar a percepção sensorial, os processos de tomada de decisão e a coordenação motora envolvidos na busca por fontes alimentares recompensadoras em moscas. Além disso, os resultados desses estudos têm implicações mais amplas para a compreensão dos comportamentos alimentares em outros organismos, incluindo humanos, já que muitos mecanismos genéticos e neurais fundamentais são conservados evolutivamente. A desregulação dos comportamentos alimentares está associada a vários distúrbios neurológicos e metabólicos¹⁰. Portanto, os mecanismos neurais e genéticos subjacentes ao comportamento de busca em moscas podem oferecer novos caminhos para a compreensão e potencialmente abordar esses complexos desafios de saúde humana.

Protocol

Moscas adultas machos da linhagem selvagem Drosophila melanogaster Canton-S (CS) foram utilizadas para o presente estudo. 1. Preparação experimental Criação de moscasColetar moscas adultas machos emergindo dentro de um período de 12 h e mantê-las em meio mosca padrão (preparado em casa) por 48 h a 25 °C com 75% de umidade relativa em um ciclo claro/escuro de 12 h.NOTA: A composição do meio de Drosophila utilizada foi (para 1 L de meio) farinha de milho (80 g), D-glicose (20 g), açúcar (40 g), ágar (8 g), fermento em pó (15 g), ácido propiônico (4 mL), 4-hidroxibenzoato de metila (1,25 g em 3 mL de etanol) e ácido ortofosfórico (600 μL) (ver Tabela de Materiais). O período inicial de alimentação garante que as moscas tenham acesso a alimentos e nutrientes suficientes antes da fase de fome. Enquanto moscas machos e fêmeas provocam o comportamento de busca, mas o tempo de fome é mais consistente entre as moscas machos. Além disso, as moscas fêmeas mudam sua preferência alimentar após o acasalamento11. Procedimento de fomeApós o período de alimentação, as moscas passam fome de comida, mas com acesso à água.NOTA: Para padronizar o estado de fome através de ensaios e cepas, sugere-se determinar a duração de 90% de sobrevivência da população sob condições de escassez de alimentos. Com base nesse resultado, as moscas SC permaneceram sem fome por 28 h (Figura 1A), pois ritmos circadianos e outros fatores podem afetar o comportamento de busca12. As mudanças circadianas das atividades de busca de moscas em diferentes momentos do dia também foram medidas (Figura 1B). Observamos uma redução da atividade relativa de busca à noite em comparação com a fase leve em moscas. Calcule a tolerância à fome de alimentos privando moscas de dois dias de idade. Coloque 15-20 moscas em um frasco para injetáveis com papel de seda embebido na parte inferior. Isso serve como substrato e garante que as moscas tenham acesso à água durante todo o período de fome. Conte o número de moscas durante o período de fome de alimentos em intervalos regulares de 1 h. A duração em que 90% das moscas famintas sobreviveram foi utilizada como período de fome (Figura 1A). Use várias réplicas (3-4 para cada cepa) para minimizar o impacto de variações individuais e fornecer uma avaliação mais confiável da tolerância à fome.NOTA: A tolerância à fome de alimento de cada cepa foi determinada a fim de estabelecer um estado de fome padronizado entre diferentes cepas e experimentos. Ao contar as moscas sobreviventes nesses intervalos, pode-se monitorar a taxa de sobrevivência ao longo do tempo e determinar por quanto tempo cada cepa poderia tolerar a privação alimentar antes de sucumbir à fome. Procedimento para registrar o comportamentoTransfira moscas famintas individuais em pequenos tubos (Figura 2A). Faça isso em lotes de 5-6 moscas para minimizar o tempo de isolamento. Ao testar moscas individuais, isolando cada mosca, quaisquer mudanças ou ações observadas podem ser atribuídas à mosca específica que está sendo observada, em vez de serem influenciadas por interações com outras moscas. Use placas de Petri de 90 mm como arena para ensaios comportamentais (placas de Petri maiores podem ser usadas. Não houve diferença no comportamento nas placas de Petri com maior diâmetro). Ilumine a arena a partir da parte inferior por um painel de LEDs brancos frios montados na superfície (Figura 2B,C). Para manter um ambiente visual uniforme e minimizar a distração externa, circunde a arena experimental por um tubo de policloreto de vinila branco (51,5 mm de altura, 114 mm de diâmetro interno).NOTA: Este tubo atua como uma barreira, impedindo que qualquer estímulo visual de fora da arena influencie o comportamento da mosca. Ao reduzir as distrações externas, pode-se focar apenas na interação da mosca com a fonte de alimento, mantendo a consistência durante todo o experimento. Use intensidade de luz de 320 lux no centro da arena. Posicione 0,2 μL de solução de açúcar no centro da arena. Solução de sacarose 500 mM foi usada nos experimentos relatados, mas isso pode ser variado. Introduzir a mosca na arena usando um tubo microcentrífugo de 2 mL (diâmetro interno de 8,7 mm, comprimento reduzido para 5 mm por enchimento de algodão na parte inferior; Figura 2A) abrigando uma única mosca invertida sobre a gota de açúcar. Assim que a mosca começar a ingerir a gotícula, remova o recipiente da mosca, dando à mosca acesso irrestrito à fonte de alimento. Filme a posição 2D da arena com uma câmera aérea.NOTA: Flea3 (Point Grey, lente de 1214 mm, ver Tabela de Materiais) foi utilizada para o presente estudo e registrada a 40 quadros por segundo (fps). No entanto, qualquer câmera que forneça bom contraste com o fundo pode ser usada. Pode-se gravar a 30-60 fps, dependendo da natureza do experimento. Grave em .avi formato, pois é compatível com o software de rastreamento. Grave o julgamento até o momento em que a mosca escapou da arena. As moscas andavam livremente e não havia tampa na arena. Ao permitir que a mosca decida quando parar de procurar, voar para longe ou caminhar até a periferia da arena, observe o comportamento natural da mosca e a estratégia de busca de alimentos. Limpe as placas de Petri com etanol 70% entre os ensaios e seque-as completamente ou então use uma nova placa de Petri.NOTA: É importante realizar todos os experimentos entre 2 h e 6 h após o acender das luzes, quando as moscas exibem níveis de atividade consistentemente altos. Esse período de tempo garante que as moscas estejam em estado ativo, maximizando as chances de observar seu comportamento natural de busca de alimento e reduzindo o impacto de outros fatores que podem afetar seu comportamento, como os ritmos circadianos. A montagem comportamental foi alojada dentro de uma sala com temperatura e umidade controladas. A arena foi colocada sobre uma mesa livre de vibrações. Esta montagem experimental envolveu o isolamento e teste de moscas individuais para sua resposta ao açúcar. Uma gota de açúcar foi fornecida às moscas famintas e seu comportamento foi filmado (Figura 2B,C, Vídeo 1). Os experimentos foram conduzidos durante um período de tempo específico, quando as moscas exibiram altos níveis de atividade consistentes. Analise as trajetórias seguindo a etapa 2 para determinar o comportamento de pesquisa. 2. Análise de trajetórias para busca local Analise os vídeos gravados usando o software Ctrax11 (consulte Tabela de Materiais).NOTA: O software rastreia e converte a posição da mosca no vídeo em coordenadas x, y, permitindo o rastreamento preciso e a análise de seus movimentos. Consulte o Arquivo Suplementar 1 para obter detalhes sobre como usar o Ctrax. Divida as trajetórias em duas fases: a fase inicial de alimentação e a fase de busca. Defina o fim da alimentação e o início da caminhada como moscas se movendo a uma velocidade >4 mm s-1 em três quadros consecutivos.OBS: Após o término da alimentação, o restante da trajetória foi utilizado como resposta de busca das moscas. Este estudo usou o VirtualDub (consulte a Tabela de Materiais) para remover a fase de alimentação dos vídeos antes do rastreamento. Quantifique a pesquisa pelos seguintes parâmetros:Comprimento do caminho: Este parâmetro representa a distância percorrida pela mosca desde o seu ponto de partida durante a busca de alimentos (em mm). Tempo de permanência: O tempo gasto pelas moscas andando durante a busca (em s). Ele indica a duração da busca e a persistência da mosca em procurar alimento. Meandro: Calcule isso como uma razão dividindo o beeline (a distância entre o primeiro e o último ponto do caminho) do caminho para o comprimento total do caminho e subtraindo de 1. Altos valores de meandro indicam maior tortuosidade na trajetória. Número de retornos: Use o algoritmo desenvolvido para identificar e contar o número de retornos usando dois círculos concêntricos.NOTA: Um círculo interno indicando a origem da busca, Rin (2,5 mm) e o círculo externo indicando a distância mínima Rout (4 mm) que a mosca teve que se afastar da origem. Um retorno foi definido como um movimento para fora do círculo externo (Rout) e depois voltando para o círculo interno (Rin). Taxa de atividade: Expressa em porcentagem, calcule a taxa de atividade determinando o tempo durante a busca de alimentos quando a velocidade de caminhada da mosca excede 2 mm/s. Esse parâmetro reflete o nível de atividade e engajamento da mosca na busca de alimentos. Distingue forrageiras ativas de indivíduos menos ativos.NOTA: MATLAB e Python foram utilizados no presente estudo para análise posterior das trajetórias. Os roteiros podem ser acessados aqui: https://github.com/eagermeagre/sugar_elicited_search. O procedimento de análise envolve o uso do software Ctrax para rastrear os movimentos da mosca e determinar parâmetros como a duração da busca de alimentos, comprimento total do caminho, tempo de busca, meandro, número de retornos e taxa de atividade. Esses parâmetros fornecem informações valiosas sobre o comportamento da mosca e a eficiência de forrageamento durante os experimentos de busca de alimentos registrados.

Representative Results

As moscas precisaram passar fome durante o período estimado pela tolerância à fome de alimento e a resposta ao açúcar foi testada individualmente (Figura 1A e Figura 2A). O comportamento foi registrado dentro de uma sala com temperatura e umidade controladas. 0,2 μL de solução de sacarose 500 mM foi usado para os experimentos relatados. A gota de açúcar foi posicionada no centro da arena e as moscas foram introduzidas ao açúcar (Figura 2B). O comportamento foi registrado até que moscas escaparam da arena. Os vídeos foram analisados para extrair coordenadas x,y e trajetórias das moscas. Vários parâmetros foram utilizados para quantificar a resposta comportamental: comprimento do caminho, tempo de permanência, meandro, número de retornos e taxa de atividade. A ingestão de açúcar em moscas famintas leva a uma busca local com um caminho sinuoso e alças (Figura 3A,C). Como controle negativo, foram registradas moscas famintas que não apresentavam açúcar8. Essas moscas, ao serem introduzidas e vazias, não iniciaram uma busca e escaparam da arena (Figura 3B,D). Este grupo é referido como moscas não alimentadas. Os parâmetros de busca: comprimento do caminho, tempo de permanência, média e número de retornos foram significativamente menores nas moscas não alimentadas em comparação com as moscas que receberam uma queda de açúcar (Figura 4A-D). Figura 1: Curvas de fome da cepa selvagem CS. (A) Curva de inanição mostrando a taxa de sobrevivência para machos e fêmeas selvagens de CS . (B) Mudanças circadianas das atividades de busca de moscas em diferentes momentos do dia. As barras de erro representam S.E.M. (n = 10). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura. Figura 2: Configuração experimental incluindo cálculo de tolerância à fome, procedimentos de registro de comportamento e análise de trajetória. (A) A tolerância à fome de alimentos foi determinada para estabelecer um estado padronizado de fome. Para o registro do comportamento, as moscas individuais foram isoladas em pequenos tubos antes do experimento. A arena comportamental, uma placa de Petri de 90 mm, foi uniformemente iluminada a partir do fundo. Uma gota de solução de açúcar foi colocada no centro e as moscas tiveram acesso irrestrito à fonte de alimento. (B) O comportamento foi registrado até que moscas escaparam da arena. A análise de vídeo utilizou o software Ctrax para rastreamento e MATLAB/Python para análise de trajetória. (C) Fotografia do arranjo experimental. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura. Figura 3: Necessidade da ingestão de açúcar para iniciar a busca local. (A) Trajetórias individuais de moscas alimentadas com 500 mM, 0,2 μL de solução de açúcar. (B) Trajetórias individuais de moscas que não receberam açúcar. (C) Sobreposição das trajetórias de busca das moscas do grupo controle (n = 11). (D) Sobreposição dos trajetos das moscas (n = 11) que não receberam açúcar. Todas as trajetórias são normalizadas até o ponto de partida da caminhada. Esta figura é adaptada de Shakeel e Brockmann8. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura. Figura 4: Redução dos parâmetros comportamentais em moscas não alimentadas. (A-D) O comprimento do caminho, o tempo de permanência, o tempo de permanência e o número de retornos foram menores para moscas famintas que não receberam recompensa por açúcar em comparação com moscas controle que receberam estímulos com açúcar. **p < 0,001, ***p < 0,0001, ****p < 0,00001, Wilcoxon Rank Sum Test. Esta figura é adaptada de Shakeel e Brockmann8. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura. Vídeo 1: Comportamento de pesquisa de uma mosca com trajetória em tempo real do caminho. Clique aqui para baixar este vídeo. Arquivo suplementar 1: instruções passo a passo para rastrear o arquivo de vídeo usando CTRAX. Clique aqui para baixar este arquivo.

Discussion

O presente estudo introduz um paradigma simples para investigar o comportamento de busca provocado por açúcar em Drosophila, descrito pela primeira vez por Dethier². Esse comportamento inato permite que as moscas se envolvam em uma busca local por recursos alimentares adicionais após o encontro de uma recompensa alimentar. O aspecto mais crucial do protocolo experimental envolve a motivação adequada das moscas. Em primeiro lugar, as moscas devem estar em estado de fome, tendo sido privadas de alimentos enquanto ainda têm acesso à água, para garantir a ingestão de açúcar. Para ter o estado de fome uniforme em todos os ensaios experimentais, a duração em que 90% da população sobrevive foi usada como o período de fome. Crucialmente, a indução de uma resposta de busca pós-alimentação requer o fornecimento de um estímulo alimentar que seja de qualidade suficiente, mas não suficiente para saciar completamente as moscas. Portanto, padronizar a concentração e a quantidade de açúcar e a duração da fome pode ser demorado, mas é imperativo para um comportamento robusto e confiável.

Neste estudo, uma solução de sacarose de 500 mM e 0,2 μL foi empregada como estímulo para moscas famintas. A ingestão de açúcar evoca um comportamento característico de busca local, caracterizado por aumento do comportamento de giro e retornos frequentes ao local da queda de açúcar (Figura 1). Por outro lado, moscas famintas que não recebem açúcar não conseguem exibir uma resposta de pesquisa. Notavelmente, todos os parâmetros relacionados ao comportamento, incluindo comprimento do caminho, tempo de permanência, meandro e número de retornos foram significativamente menores em moscas não alimentadas. Demonstramos anteriormente que a ingestão de água isoladamente não provoca uma resposta de busca⁹.

Essa configuração oferece uma abordagem econômica e de baixa manutenção para estudar esse comportamento inato. Embora uma arena retroiluminada seja usada neste estudo, a iluminação superior também pode ser empregada, desde que haja contraste suficiente entre a mosca e o fundo. O software de rastreamento utilizado baseia-se na detecção do movimento da mosca contra um fundo estático¹³. As configurações de câmera e resolução podem ser ajustadas com base na escala específica de comportamento sob investigação. É importante ressaltar que essa metodologia possibilita o estudo de vários componentes do comportamento de forrageamento, incluindo atenção sensorial durante o forrageamento, engajamento e alimentação de alimentos, controle locomotor da busca, processos de tomada de decisão associados à exploração e exploração, entre outros. Além disso, esse paradigma facilita a investigação da busca local, um comportamento que é comumente observado em diversos táxons em vários contextos^ecológicos6. Estudar este comportamento em Drosophila, abre caminhos para a investigação científica visando a compreensão das vias neurais envolvidas no forrageamento. Estudamos a busca local em abelhas melíferas e mostramos que o comportamento tem semelhança com as moscas ^7,8.

Estudos recentes têm demonstrado que o comportamento de busca local pode ser desencadeado pela ativação optogenética de vários neurônios sensoriais de açúcar em moscas 14,15,16. No entanto, ainda não está claro até que ponto as pesquisas locais observadas nesses estudos representam com precisão o comportamento natural das moscas em resposta ao consumo real de açúcar. O comportamento alimentar é fortemente regulado em moscas, e esses achados indicam que a ativação de receptores de açúcar faríngeo inicia o comportamento de busca. A sensilla gustativa tarsal é responsável por detectar o açúcar e induzir o reflexo de extensão da probóscide, enquanto os neurônios gustativos faríngeos determinam se a alimentação deve prosseguir^17,18. Uma vez ingerida, a solução açucarada percorre o esôfago até o proventrículo e entra na cultura, com sua expansão monitorada por um nervo recorrente¹⁹. Além disso, vale ressaltar que alguns dos estudos citados envolveram o aproveitamento ou confinamento de moscas, sendo que esse método permite que os animais caminhem livremente durante todo o experimento. As moscas em nossos experimentos estavam suficientemente motivadas para permanecer e procurar dentro da arena sem a imposição de uma tampa.

Compreender a intrincada interação entre vias neurais, fatores genéticos e pistas ambientais que governam o comportamento de busca em moscas pode lançar luz sobre os princípios fundamentais do processamento de informações, aprendizagem e formação da memória. Além disso, a desregulação do comportamento de forrageamento tem sido implicada em vários distúrbios humanos, incluindo transtornos alimentares e obesidade. A extensa gama de ferramentas neurogenéticas disponíveis em Drosophila fornece um recurso valioso para investigar o comportamento de busca provocado pelo açúcar e desvendar os mecanismos neurais e genéticos subjacentes ao forrageamento. Em combinação com a manipulação optogenética e a imagem funcional, esse paradigma apresenta uma abordagem poderosa e promissora 20,21,22. No entanto, modificar a configuração para manipulação em tempo real da atividade neuronal com optogenética pode ser um desafio. Para monitorar a atividade neuronal no cérebro enquanto uma mosca está realizando o comportamento de busca, uma configuração diferente será necessária, como a mosca amarrada em uma bola de piso. Muitos aspectos do comportamento de forrageamento, como a regulação alimentar e os processos de tomada de decisão, são altamente conservados entre as espécies. Portanto, os insights obtidos com o estudo dos mecanismos neurais de forrageamento em moscas podem fornecer informações valiosas sobre processos semelhantes em outros organismos, incluindo humanos.

Açıklamalar

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Agradecemos a Ravikumar Boyapati por ajudar na montagem da arena. Este trabalho é financiado pela Wellcome trust DBT Intermediate India Alliance grant (Grant number IA/I/15/2/502074) para P.K. M.S. foi financiado por uma bolsa do Conselho Indiano de Pesquisa Médica (ICMR). A.B. foi financiado por fundos institucionais NCBS-TIFR (No. 12P4167) e pelo Departamento de Energia Atômica, Governo da Índia (No. 12-R& D-TFR-5.04-0800 e 12-R& D-TFR-5.04-0900).

Materials

2 mL Eppendorf tube	Sigma Aldrich	BR780546	Used to introduce the fly to the sugar drop
Agar	SRL	9002-18-0
Azure lens	https://www.rmaelectronics.com/azure-photonics-azure-1214mm/
Camera	Logicool, Japan
Corn flour	locally available
Ctrax software	https://ctrax.sourceforge.net/
D-glucose	SRL	50-99-7
Flea3	Sony		https://www.flir.com/products/flea3-usb3/?vertical=machine+vision&segment=iis
glass tube	Borosil		Used to house the flies individually
Kimwipe	Kimberly-Clark	34155	Used to provide access to water for flies during food starvation
LED light panel			custom-made in the workshop
Light Meter	TENMARS	TM-203
Methyl 4-hydroxybenzoate	Fisher Scientific	99-76-3
Orthophosphotic acid	SRL	7664-38-2
Petri dish (90 mm)	Tarsons	460090
Propionic acid	SRL	79-09-4
Sucrose	Qualigens	Q28105
Sugar	locally available
VirtualDub	https://www.virtualdub.org/
White polyvinyl chloride pipe (67 mm inner diameter × 100 mm height)			custom-made in the workshop
Yeast powder	SRL	REF-34266

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Drosophila Sugar-elicited Behavior Local Search Foraging Neural Circuits Honeybee Dance Genetic Model Path Integration Taste Receptor Neurons

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Shakeel, M., Kaushik, S., Tanimura, T., Brockmann, A., Kain, P. Tracking Sugar-Elicited Local Searching Behavior in Drosophila. J. Vis. Exp. (201), e65955, doi:10.3791/65955 (2023).