Métodos para o Estudo das Contribuições Uterinas para o Estabelecimento da Gestação em Modelo de Camundongo Ovariectomizado

Com o crescente uso de tecnologias de reprodução assistida nas últimas décadas, muitas barreiras à concepção foram superadas, permitindo que muitos casais constituíssem família apesar dos problemas de fertilidade¹. Déficits de ovócitos ou espermatozoides muitas vezes podem ser contornados usando fertilização in vitro ou injeção intracitoplasmática de espermatozoides; No entanto, questões relacionadas ao útero e à receptividade endometrial permanecem uma “caixa preta” elusiva do potencial reprodutivo².

A gravidez é estabelecida quando um embrião de alta qualidade interage com sucesso com um endométrio receptivo (revestimento uterino). As chances de sucesso da gravidez em qualquer ciclo menstrual são baixas, em torno de 30%^3,4. Das que são bem-sucedidas, apenas 50%-60% avançam para além de 20 semanas de gestação, sendo a falha de implantação responsável por 75% das gestações que não atingem 20 semanas³. Apesar desses números remontam ao final da década de 1990, o campo ainda não superou as limitações causadas por um endométrio inadequadamente receptivo. Isso resultou em taxas de sucesso de FIV estagnadas e, às vezes, declinantes nos últimos anos ^5,6.

Mulheres com infertilidade inexplicável muitas vezes têm uma janela deslocada de receptividade ou são incapazes de alcançar a receptividade por razões desconhecidas. Recentemente, foi desenvolvido o arranjo de receptividade endometrial, que avalia a expressão de centenas de genes com o objetivo de adequar o momento da transferência embrionária à janela de receptividade do indivíduo ^7,8,9. No entanto, o campo ainda carece de uma compreensão da patogênese das complicações da gravidez que se manifestam após o processo de implantação ser concluído.

O sistema reprodutor feminino é altamente dinâmico e sob rígido controle hormonal. O eixo hipotálamo-hipófise-gonadal (HPG) controla a liberação do hormônio luteinizante e do hormônio folículo-estimulante, que regulam aspectos do ciclo ovariano, incluindo a maturação dos folículos e a atividade de estrogênio e progesterona. Por sua vez, o ciclo menstrual uterino é regulado por estrógenos e progesterona^10,11. Assim, o estudo dos mecanismos biológicos uterinos é complicado pela influência ovariana. Por exemplo, ao estudar como as terapias contra o câncer podem afetar o útero, pode ser difícil distinguir se qualquer fenótipo uterino observado (como perda gestacional ou acíclica menstrual) é o resultado de um insulto direto ao útero ou um efeito consequente de danos aos ovários.

Para compreender de forma abrangente a fertilidade, as contribuições uterinas para a gravidez devem ser caracterizadas. É importante ressaltar que esse entendimento deve ir além da função uterina sob controle ovariano. Isso não pode ser estudado em humanos; portanto, modelos animais são frequentemente empregados. Como tal, a ooforectomia (OVX) é comumente usada para permitir que os pesquisadores regulem os ciclos estrais dos roedores (análogos ao ciclo menstrual), fornecendo hormônios exogenamente. Além disso, a OVX permite que as respostas uterinas sejam estudadas independentemente da influência ovariana¹². No entanto, se os hormônios não forem fornecidos imediatamente pós-OVX, um fenótipo de menopausa ocorrerá, o que precisa ser cuidadosamente considerado pelos pesquisadores.

A OVX é frequentemente utilizada em modelos de roedores13,14,15,16,17 e é relativamente fácil de ser realizada após treinamento adequado. Os métodos variam dependendo se o ovário sozinho ou o ovário e o oviduto são removidos, bem como dependendo da idade do animal (animais adultos, cicladores têm ovários maiores com um corpo lúteo visível em sua superfície, o que significa que seus ovários são mais fáceis de visualizar). Da mesma forma, existem muitos métodos de suplementação hormonal, incluindo injeções subcutâneas¹⁴, pastilhas de liberação lenta 15, minibombas osmóticas¹⁸ e enxerto ovariano.

Neste artigo, instruções detalhadas são fornecidas sobre como realizar ooforectomia e preparar três tipos de suplementação hormonal, incluindo injeções subcutâneas, pastilhas de liberação lenta e mini bombas osmóticas. Dois protocolos detalhados são fornecidos para desfechos experimentais que se beneficiam da OVX seguida de suplementação hormonal exógena (transferência embrionária e decidualização artificial). Este artigo discute os pontos fortes e fracos de cada abordagem com o objetivo de orientar os pesquisadores sobre como realizar estudos para isolar os impactos sobre o útero, especificamente nos campos de pesquisa da gravidez e fertilidade.