通过直接生物测定法鉴定海葵粗提取物中的溶血和磷脂酶活性

海洋动物是生物活性化合物的丰富来源。近几十年来，海葵毒液的组成引起了科学的关注，因为它由多种多肽组成，具有溶血性，细胞毒性，酶促性（磷脂酶，蛋白酶，几丁质酶）和神经毒性活性和对蛋白水解活性的抑制作用¹。此外，这些多肽是开发分子工具在生物技术和治疗用途中的潜在来源^2，3。

关于海葵毒液及其分子成分的报道很少，因为获得毒液的复杂性，甚至分离和毒素的表征。报告中使用的提取方法涉及裂解和排空与毒^液产生1相关且无关的细胞内容物。

所有蜈蝓病患者的一个特殊特征是缺乏集中在单个解剖区域的毒液生产和释放系统。相反，线虫囊是保持毒液^{4，5的结构}。其他类型的细胞，称为表皮腺细胞，也分泌毒素，并且也分布在海葵^体内6。

获得毒液的第一个也是最关键的挑战是在后续过程中产生具有充分操作的提取物，而不会灭活或降解不稳定的蛋白质。接下来，必须裂解细胞，并且组分 – 在这种情况下，必须有效和快速地提取多肽，避免蛋白水解和水解，同时消除其他细胞组分⁷。

使用不同的方法获得海葵的粗提取物;有些涉及牺牲生物体，而另一些则允许它保持活力。暗示使用生物体整个身体的方法允许从毒液⁸中释放大多数毒素，而保持生物体存活的方法仅提取毒液^{的某些成分9}。提取物的制备需要通过特定的生物测定法评估目标物质的存在和效力，其中包括通过 体内 或 体外 方法观察药理作用的策略¹⁰。

海葵毒含有细胞溶解多肽，成孔毒素（PFT）¹¹和磷脂酶¹²;这些分子是研究蛋白质 – 脂质相互作用，癌症治疗中的分子工具以及基于纳米孔3的生物传感器^的模型。海葵PFT的分类是根据其大小或分子量进行的，从5 kDa到80 kDa。20 kDa PFT是研究最多和被称为放线菌素¹¹的，因其在开发分子工具方面具有特别感兴趣的生物医学潜力，可用于抗癌，抗菌和基于纳米孔的生物传感器。另一种细胞溶解素，包括磷脂酶，特别是磷脂酶A2（PLA2）¹³，释放脂肪酸并水解磷脂，破坏细胞膜的稳定性。由于这种作用机制，PLA2有望成为炎症性疾病研究和应用的重要模型。它可以作为研究细胞膜¹⁴中脂质行为的模型。

在这里，我们描述了一种有效的方案，用于从海葵 Anthopleura dowii Verrill（1869）获得粗提取物，并检测溶血素和磷脂酶。两者都是相关的毒素，可以用作设计新分子工具的模板。