Covid-19에 대한 다중 분석 물질 면역 비드 분석을 사용한 혈청 전환의 동적 모니터링

일반적인 분석 결과 및 성능 평가면역비드 분석은 일반적으로 도 1에 제시된 각각의 패널에 예시된 바와 같이, 여러 (로그) 크기의 순서에 걸쳐 평가될 때 시그모이드 곡선을 제공한다. 사용자는 멀티플렉스의 각 분석물에 대한 최적 농도 범위를 실험적으로 정의하여 전체 정량 범위를 결정하고, 극단(정량 하한[LLOQ] 또는 정량 상한[ULOQ]에 근접하는 영역)을 과도하게 샘플링하지 않도록 해야 합니다. 그러나 분석에 필요한 실제 범위는 주어진 희석 인자에서 생물학적 매트릭스 (즉, ‘미지수’)에서 표적 분석물의 분포에 의해 결정됩니다. 또한, 표준 곡선이 일반적으로 4- 또는 5-파라메트릭 적합 알고리즘을 사용한 선형 회귀를 통해 해석되지만, 주어진 곡선의 선형 부분은 일반적으로 정량의 선형 (y = mx + b) 모델을 사용하여 정량적 정확도에 대한 가장 큰 신뢰를 제공합니다. 주어진 희석 인자에서 알려지지 않은 것에 대한 관찰된 값에 대한 보정 곡선을 일치시키는 것이 정량적 분석 개발의 목표가 되어야 한다. 이와 관련하여, 1:5 연속 희석 계열에 기초한 7-포인트 표준 곡선을 스파이크 S1, 뉴클레오캡시드 및 멤브레인 항체의 경우 각각 1 μg/mL 내지 0.000064 μg/mL 사이, 멤브레인의 경우 5 μg/mL 및 0.00032 μg/mL 사이의 범위인 멤브레인 항체에 대해 평가하였다(도 1에 도시된 바와 같이). 각 분석에 대한 검출의 하한(LLOD)은 그 배경과 구별할 수 있는 신호를 산출하는 가장 낮은 분석물 농도로 정의되었다. LLOD는 앞서 설명한 수학식8,9, LLOD = LoB + 1.645(SD저농도 샘플)에 의해 식별될 수 있다. LoB는 블랭크의 하한이며, 0 값이 예상될 때 블랭크로부터 생성되는 분석물의 “명백한” 농도이며, 이 방정식 LoB = 평균블랭크 + 1.645(SD블랭크)8을 사용하여 확인할 수 있습니다. 이 방법을 기반으로 스파이크 S1 분석의 MFI 값은 134.38 ~ 20191.2 범위였으며 134.38 MFI는 0.00024 μg/mL를 나타내며 LLOD로 정의됩니다. 멤브레인 분석의 경우, 실제 MFI 범위는 52.24 ~ 4764.9였으며, 52.24 MFI는 0.004885 μg/mL로 계산되어 LLOD로 할당되었습니다. 뉴클레오캡시드 분석의 MFI 범위는 517.9 내지 19666.34였으며, 517.9는 LLOD인 0.00024 μg/mL로 규정되었다. 검출의 상한(ULOD)은 MFI의 변화가 더 이상 선형이 아니며 신호 응답이 포화된 후 분석물의 농도로 정의됩니다. 이 곡선의 완전한 시그모이드 특성은 Nucleocapsid 곡선을 제외하고 테스트 된 표준에 대해 관찰 할 수 없다는 점에 유의해야합니다. 그러나, 현재까지 분석된 모든 미지의 것에 대해 관찰된 MFI 값(1:500 희석시)이 주어진 경우, 각 분석물에 대해 제시된 곡선 범위 내에 있으며, 선형 회귀를 통해 4- 또는 5-파라메트릭 핏을 사용하여 쉽게 정량화된다. 분석 정밀도인트라-어세이 정밀도: 분석의 네 번의 반복실험은 %CV로 계산되거나, 표준 편차의 몫과 평균을 100을 곱한 분석 정밀도를 평가하기 위해 동일한 플레이트에서 수행되었다. 표준 포인트 2 및 5는 이러한 표 2에 카탈로그된 값과 함께 이러한 표에 대해 선택되었습니다. %CV 값에 대한 전형적인 허용 가능한 상한값 임계값은 ≤20%이며, 이는 멤브레인 IgG의 표준 2에 대한 것을 제외하고는, 이들 데이터에 대해 관찰되었으며, 이는 배경 수준에서 비롯될 가능성이 있고 외딴 값(데이터는 나타내지 않음)을 제거함으로써 정류될 수 있다. 판독 값에 대한 명백한 불안정성이 MFI 값이 <200인 막 분석에 대해 관찰되었으며, IgA 및 IgM 이소형의 경우 가장 흔하다는 점에 유의해야 한다. 인터-어세이 정밀도: 비드 세트의 세 개의 별개의 배치를 각 어세이에 대해 제조하고, 인트라-어세이 정밀도에 대해 정의된 바와 같이 테스트하였다(위 및 도 1에서 볼 수 있음). 인터-어세이 가변성은 표 3에 나타낸 바와 같이 3개의 배치들 각각에 대한 평균 결과로부터 %CV를 계산함으로써 평가되었다. 다시, 허용가능한 %CV에 대한 상한 임계값은 시험된 모든 조건에 대해 존재하는 ≤20%로 설정된다(위에서 살펴본 바와 같이 멤브레인 IgG의 표준 2와 유사한 효과로). 순 MFI 값의 배치-배치 간 가변성은 커스텀 어세이 개발 동안 동일한 면역시약의 다중 배치 내에서 일반적으로 관찰된다는 점에 유의해야 한다. 상업적으로 수득된 항-표적 항체 (예를 들어, 토끼 항-스파이크 S1)로부터 건립된 보정 곡선의 사용은 항-종 검출 항체에 이어서 분석 결과에 일관성을 제공할 수 있고, 상이한 기간에 다수의 배치들 사이의 비교를 허용할 수 있다. 인간 샘플과의 인터-어세이 정밀도: SARS-CoV-2 감염에 대한 최초 보고된 증상의 한 달 이내에 수집된 인간 혈장 샘플(n=5)로 인간 분석 정밀도의 평가를 반복하였다; 분석의 세 개의 별개의 배치(즉, 비드 세트의 상이한 제제)로 달성된다. 이러한 결과는 표 4에 묘사되어 있으며 ≤20%의 전형적인 상한값을 갖는 %CV 값을 갖는 정밀도를 입증한다. 스파이크 S1, 뉴클레오캡시드 및 막 IgG 역가에 대한 평균 %CV 값은 각각 9.9%(범위 2.6%-18%), 11.0%(범위 3.5%-24.4%), 및 7.6%(범위 3.2%-12.9%)로 계산되었다. 이 세 분석물의 IgM 및 IgA 역가와 유사한 관찰이 이루어졌으며, 모두 %CV 값 <20%를 제공하였다. 이에 대한 유일한 예외는 막 단백질에 대한 피험자 5 IgM 역가였으며, 이는 후속적으로 특이치로서 배제되었다. 인간 피험자 평가에 대한 정밀도 값은 토끼 항체에 대해 위에서 본 것과 일치하며, 이는 이들 검정이 검정 정밀도에 거의 영향을 미치지 않는 다수의 종에서 항원의 역가를 평가하도록 쉽게 재구성될 수 있음을 시사한다. 상기 언급된 바와 같이, MFI 값이 <200인 멤브레인 분석법에 대해 관찰된 판독 값에 대한 명백한 불안정성이 존재하였고, IgA 및 IgM 이소형의 경우에 가장 흔하게 나타났다. 일차 항체 농도 최적화분석물 ‘포획 시간’을 항원 컨쥬게이션된 비드로 평가하고, 혈장 검체 또는 표준물질 내의 항체를 1차 인큐베이션의 길이를 변형시킴으로써 시험하였다(30분, 1h, 2h, 및 4h). 평균 MFI의 차이는 특정 인큐베이션 및 최대 인큐베이션 시간의 몫으로서 제시되며, 도 2에서는 30분 인큐베이션 (최소 지속기간)과 4 h 인큐베이션 (최대 지속) 사이의 % Max라고 한다. 120분에서의 값은 스파이크 S1, 멤브레인 및 뉴클레오캡시드 항체에 대한 IgG 역가에 대해 최적이었으며, 이는 빠른 1차 항체 결합 동역학을 나타내며, 분석 처리량을 증가시키는 유연성을 허용한다. 그러나, IgA 및 IgM (데이터는 나타내지 않음) 이소형에 대해 더 느린 동역학이 관찰되었고, 도 2에 도시된 바와 같이 4 h 시점에서의 피크 포획 수준을 입증하였다. 전반적으로, 접근 분석 포화도와 생산 중일 때 각 분석을 실행하기위한 실용적인 시간 편익 (처리량을 최대화하기 위해) 사이에는 균형이 있습니다. 이를 통해, 이들 발견에서 IgG의 경우 30분, IgM의 경우 60분, IgA의 경우 120분의 최소 배양 시간에서 정량적 목적에 적합한 신호가 관찰되었다. 이차 항체 농도 최적화5 농도의 2차 항체(염소 항-인간 IgG, PE-접합; 염소 항-인간 IgA, PE-접합; 염소 항-인간 IgM, SB-접합됨)를 시험하였다(0.5, 1, 2, 4, 및 8 μg/mL). 모든 항체는 어떤 조건에서도 명백한 신호 포화도 없이 광범위한 신호를 밝혀냈으며, 따라서 임의의 농도에 대한 선형 측정을 보장하였다. 예를 들어, 0.5 μg/mL에서 SB 컨쥬게이션된 염소 항인간 IgM을 사용한 스파이크 S1 분석에서 생성된 평균 신호는 최대 신호(8 μg/mL)에서 생성된 MFI의 13.2%인 반면, 4 μg/mL에서 생성된 MFI는 최대 신호에서 나타나는 MFI의 73.3%였다. 다른 Spike S1 항체 이소형, 막 항체, 및 뉴클레오캡시드 항체로부터의 신호 범위에 대한 세부사항은 표 5 및 도 3에 포함된다. 실용적인 점으로, 최적의 이차 항체 농도와 이전에 언급 된 4 μg / mL 이차 항체 농도 사이의 주요 영향은 분석 감도 및 분석 비용 측면에서 반영됩니다. 즉, 8 μg/mL 이차 항체 농도는 낮은 항체 역가 또는 낮은 양의 귀중한 샘플로 적용하는데 바람직할 수 있지만, 이들 분석과 관련된 비용은 이전에 정의된 4 μg/mL 농도의 사용보다 상당히 높을 것이다. 반대로, 높은 항체 역가가 관찰되는 경우 (예 : Covid-19 예방 접종을 경험 한 개인 또는 비제한적인 양의 혈청)는 더 적은 양의 이차 항체 (예 : 1 μg / mL)의 적용을 통해 비용 이익을 볼 수 있습니다. 이차 항체 인큐베이션 최적화이차 항체 인큐베이션의 지속기간의 잠재적 영향은 또한 인큐베이션의 길이를 변형시킴으로써 조사하였다 (15, 30, 60, 및 120 분). 일반적으로, 특정 인큐베이션 및 최대 인큐베이션 시간의 몫으로서 제시되는 바와 같은 평균 MFI의 차이는, %Max라고 불리며, 15분 인큐베이션(minimum duration)과 120분 인큐베이션(maximum duration) 사이의 스파이크 S1, 멤브레인, 및 뉴클레오캡시드 항체에 대해 각각 30%, 55%, 및 50%를 초과하지 않았으며, 이차 항체 결합에서 빠른 동역학적 단계를 나타내고 분석 처리량을 증가시키는 수단을 포함한다. 표 6은 모든 인큐베이션 시간에 대한 신호 변화에 대한 세부사항을 포함한다. 이 분석의 상이한 인큐베이션으로부터의 관찰된 신호의 예시는 도 4에 도시되어 있다. 듀얼 채널 성능 및 특이성각각의 분석물에 대해, 단일 리포터 포맷 실행(IgG-PE 전용, IgA-PE 전용, 또는 IgM-SB만)을 이중 리포터 포맷으로 실행했을 때 동일한 분석물에 대해 생성된 신호와 비교하였다(예를 들어, 스파이크 S1 IgG-PE 대 스파이크 S1 IgG-PE와 조합된 스파이크 S1 IgM-SB 이중 리포터 포맷). 두 가지 형식으로 생성된 신호에 대한 분석 정밀도(%CV로 표시됨)를 본 실험의 결과에서 관계를 분석하는데 사용하였다. 스파이크 S1 분석의 %CV 값은 IgM, IgG 및 IgA에 대해 각각 6.19%, 16.4% 및 23%였다. 멤브레인 분석의 경우, %CV 값은 IgM, IgG 및 IgA에 대해 각각 3.3%, 7.9% 및 16.4%였다. 마지막으로, 뉴클레오캡시드 분석은 IgM, IgG 및 IgA에 대해 각각 8.7%, 10.3% 및 24.2%에서 %CV 값을 제공하였다. IgM 및 IgA 이소타입에 대해 관찰된 정밀도 값은 더 긴 인큐베이션 시간이 이들 부류의 면역글로불린에 걸친 알려진 결합 동역학적 차이로 인해 우수한 분석 결과를 부여할 수 있음을 시사한다. 도 4는 상이한 농도의 이차 항체의 형식 사이의 일치를 보여준다. 리포터 채널의 특이성을 확인하기 위해, 하나의 리포터 채널을 한 번에 테스트하고, 다른 채널은 비특이적 신호(출혈 효과)에 대해 문의하기 위해 블랭크로 할당하였다. 이러한 발견은 조건의 스펙트럼에 걸쳐 높은 특이성을 감안할 때 두 리포터 채널 사이에 무시할 수있는 교차 신호 오염이 있음을 나타냅니다. 이러한 발견은 그림 5에 예시되어 있다. 전반적으로, 우리는 채널 1에서 채널 2까지 6.45 %의 간섭을 관찰했습니다. 그러나, 신호의 크기가 설명되었을 때, 우리는 이중 리포터 모드에서 다음과 같은 잠재적 간섭 수준을 관찰했다: 스파이크 IgG/IgM은 71.98%, 스파이크 IgA/IgM은 28.11%에서; 막 IgG/IgM에서 7.41%, 멤브레인 IgA/IgM에서 134.61%; 뉴클레오캡시드 IgG/IgM은 146.03%, 뉴클레오캡시드 IgA/IgM은 112.13%이다. 지정된 구성에서, 이것은 IgA 이소형과 조합된 스파이크 IgM의 측정, IgM 이소형을 갖는 막 IgM, 및 이중 채널 포맷에서 수행되지 않은 뉴클레오캡시드 측정의 측정을 필요로 할 것이다. 이러한 발견은 IgA 및 IgG가 채널 1의 채널 2 및 IgM에서 측정되는 라벨링 전략의 역전에 대한 탐구를 필요로 할 수 있다. Covid-19 예방 접종 후 혈청 전환 사건 평가혈청 전환은 스파이크 S1 분석법으로 IgA, IgM 및 IgG의 평가시 네 명의 피험자에서 사전 백신 접종에서 Covid-19 백신 접종 시리즈 완료 후 4 개월에 이르는 시점에서 모니터링되었습니다. 측정은 이중 채널 모드 (IgG/IgM 및 IgA/IgM, IgM 값은 평균화됨)에서 달성되었다. 모든 피험자는 표준 관행에 따라 2 단계 예방 접종으로 백신을 접종 받았으며 첫 번째 용량과 두 번째 투여 사이에 21 일 간격을 두었습니다. 각 피험자의 면역 반응의 플롯은 도 6A-C에 도시되어 있다. 뉴클레오캡시드 및 막 항원에 대한 면역 반응 값은 평가된 모든 면역글로불린에 대한 배경 수준에서 관찰되었고(데이터는 나타내지 않음), 이는 백신 접종 전 시간에 이전에 SARS-CoV-2 감염이 문서화되지 않은 피험자와 일치하였다. 전반적으로, 관찰된 스파이크 S1 IgA 및 IgM 값은 IgG 이소형의 역가보다 약 40배 더 낮았고, 피크 역가는 IgM 및 IgG 이소형과 IgA 이소형에 대해 14일 이내에 볏이 볏을 볏이 되어 두 번째 투여 시점(0일째)과 두 번째 투여 후 14일 사이에 피크 역가에 도달하고, 주제에 따라. 주목할 만하게, 스파이크 S1 IgG 역가는 대상체-의존적 방식으로 고도로 가변적인 속도로 백신접종 완료 후 넉 달의 과정 동안 붕괴되기 시작한다. 그림 1: 대표적인 3플렉스 표준 곡선. 세 분석물에 대한 대표적인 표준 곡선; (A) 스파이크 S1의 경우 1μg/mL, (B) 멤브레인의 경우 5μg/mL, (C) 뉴클레오캡시드 및 항체의 경우 1μg/mL에서 시작하는 7점, 1:5 연속 희석 곡선으로 표시됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. 그림 2: 1차 항체/샘플 배양 시간 최적화: 표준 1-7의 경우 30분에서 4시간 사이의 일차 항체/샘플(항체 포획)의 서로 다른 배양 시간으로부터 생성된 평균 MFI 신호(표 1에 표시됨). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. 그림 3: 이차 항체 농도 최적화 및 이중 채널 성능. 곡선은 시험된 이차 항체 농도로부터 생성된 평균 MFI(시리즈에서 가장 높은 기록값으로 정규화됨)를 보여주며, 이는 0.5-8 μg/mL에 이른다. 각 인스턴스는 실험 포맷의 차이를 이해하기 위해 단일- 및 이중-채널 분석으로서 둘 다 수행되었다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. 그림 4: 이차 항체 배양 시간 최적화, 이중 채널 포맷. 이차 항체와의 인큐베이션 시간에 대하여 관찰된 MFI 값(계열에서 가장 높은 기록값으로 정규화됨)의 대표적인 플롯. 실험은 (A-C) IgA/IgM 또는 (D-F) IgG/IgM 조합과 같은 이중 채널 분석으로서 수행되었다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. 그림 5: 이중 채널 분석에 대한 특이성 평가. 블랭크로 지정된 각각의 조합 중 하나를 갖는 이중 채널 분석 포맷의 분석 결과는 교차 채널 형광 또는 간섭의 결여를 예시한다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. 그림 6: Covid-19 백신 접종 후 혈청 전환의 그림. Covid-19 백신접종 과정 동안 (A) IgG, (B) IgM, 및 (C) 스파이크 S1 항원에 대한 IgA 항체의 상대적 역가를 예시하는 플롯 (사전 백신접종 – 완료 후 4개월); 시간은 백신 접종 시리즈의 완료와 관련된 일로 표시됩니다. 백신 투여의 일반적인 점(빨간색 선)이 표시되어 있다. 실험은 프로토콜에 설명된 바와 같이 이중 채널 모드에서 수행되었다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. 표준 번호 희석 시리즈 스파이크 방지 S1 또는 N(μg/mL) 멤브레인 방지(μg/mL) 빈 빈 – – 1 성7 1:1 1 5 2 성6 1:5 0.2 1 3 성5 1:25 0.04 0.2 4 성트4 1:125 0.008 0.04 5 성3 1:625 0.0016 0.008 6 성트2 1:3125 0.00032 0.0016 7 성1 1:15625 0.000064 0.00032 표 1: 표준 곡선에 대한 희석 시리즈: IgG 혈청형에 대한 표준 곡선에 사용된 희석 인자의 표; α-Spike S1 및 α-Nucleocapsid의 경우 1μg/mL, α-Membrane 항체의 경우 5μg/mL에서 시작하는 7점, 1:5 연속 희석 곡선으로 제시됩니다. 분석물 견본 담당자 1 담당자 2 담당자 3 담당자 4 애비뉴 증권 시세 표시기 %CV 스파이크 S1 성병2 369.4 356.9 295.2 271.5 323.3 47.4 14.6 성병5 3869.1 3437 3970.2 4240.7 3879.3 334 8.6 양피지 성병2 40.6 37.7 49.9 27.8 39 9.1 23.3 성병5 733.2 731.3 724 678.1 716.7 26 3.6 뉴클레오캡시드 성병2 1746.7 1790.8 1577.3 1664.8 1694.9 94.2 5.6 성병5 15598.1 14735.5 18369.5 17408.5 16527.9 1657.7 10 표 2: 인트라-어세이 정밀도: 분산의 퍼센트 계수 (%CV)는 동일한 실험에서 단일 분석 배치를 갖는 표준 2 (STD2) 및 표준 5 (STD5)에서의 표준 항체 혼합물의 네 번의 반복실험으로부터 계산된다. 반복실험 및 평균에 대해 제공된 값은 관찰된 MFI 값을 나타냅니다. 분석물 견본 배치 1 배치 2 일괄 처리 3 애비뉴 증권 시세 표시기 %CV 스파이크 S1 성병2 383.2 424.4 379.9 395.8 24.8 6.3 성병5 5639.7 6062.5 6384.3 6028.8 373.4 6.2 양피지 성병2 39.1 58.5 59.1 52.2 11.4 21.8 성병5 732.3 941.4 701.1 791.6 130.7 16.5 뉴클레오캡시드 성병2 1342.6 1621 1718.2 1560.6 195 12.5 성병5 13543.9 14843.2 17883.4 15423.5 2227.2 14.4 표 3: 표준 샘플을 사용한 인터 어세이 정밀도: 분산의 퍼센트 계수(%CV)는 분석의 세 개의 별개의 배치로부터 계산되고, 동일한 실험에서 표준 2 및 표준 5에서 평가되었다. 반복실험 및 평균에 대해 제공된 값은 관찰된 MFI 값을 나타냅니다. IgG-PE IgM-SB 이가-PE 애비뉴 MFI %CV 애비뉴 MFI %CV 애비뉴 MFI %CV 스파이크 S1 주제 1 8002.3 17.7 1949.5 1.3 2045.8 5.5 주제 2 19155.8 7.3 918.6 4.1 1684.5 3.9 주제 3 17865.6 18.0 549.4 3.8 961.3 8.1 주제 4 11901.1 2.6 1603 4.8 8736.4 5.5 주제 5 9801.8 4.0 1014.1 3.0 2747.6 9.3 뉴클레오캡시드 주제 1 15097.8 11.3 1049.7 9.9 5276.5 3.9 주제 2 15204.3 12.1 265.9 5.2 6761.3 11.9 주제 3 18471.7 24.4 329.1 4.5 14308 2.9 주제 4 16424.7 3.5 2418.1 0.1 4234.7 4.2 주제 5 13344.9 3.6 225.6 10.0 13436.5 9.7 양피지 주제 1 514.6 8.6 180.6 14.0 141.2 9.8 주제 2 196.8 5.2 57 20.7 55.5 13.0 주제 3 553.7 12.9 54.5 21.2 191.2 18.6 주제 4 377.9 3.2 68.1 22.1 62 2.3 주제 5 325.4 8.2 11.4 91.6 74.6 20.8 표 4: 인간 샘플과의 상호 분석 정밀도: SARS-CoV-2 감염이 있는 5명의 인간 피험자로부터 혈장 샘플(500배 희석)로 시험한 분석의 세 배치로부터 계산된 분산의 평균 퍼센트 계수(%CV). 스파이크 S1 양피지 뉴클레오캡시드 μg/mL 애비뉴 MFI % 최대. 애비뉴 MFI % 최대. 애비뉴 MFI % 최대. IgM 0.5 186 13.2 32 25.2 132.7 13.6 1 304.2 21.6 45.8 36 194.4 19.9 2 664.5 47.2 78.8 61.9 458.2 47 4 1032.1 73.3 101.3 79.6 707.8 72.6 8 1407.1 100 127.2 100 975 100 IgG 0.5 809.7 4.9 27.5 15 1355.6 6.3 1 1696.9 10.2 40.6 22.2 2782.1 13 2 4543.8 27.3 68.3 37.3 6661.2 31.2 4 10003.5 60 110.7 60.5 12605.6 59 8 16662.8 100 182.9 100 21360.6 100 이가 0.5 797.4 19.3 31.1 47.2 2056.5 16.1 1 1529.5 37 41.4 62.8 3869 30.4 2 2261.3 54.7 48.6 73.3 6648.9 52.2 4 2320.4 56.2 48.3 73.2 6548.1 51.4 8 4132.2 100 65.9 100 12744.8 100 표 5: 이차 항체 농도 최적화: 0.5 μg/mL에서 8 μg/mL에 이르는 다양한 농도의 이차 항체로부터 생성된 평균 MFI 신호. 또한 각 신호의 값은 상대적인 신호 크기를 보여주기 위해 8μg/mL(“최대”)에서 신호의 백분율로 표시됩니다. 스파이크 S1 양피지 뉴클레오캡시드 인큐베이션 시간(분) 애비뉴 MFI % 최대. 애비뉴 MFI % 최대. 애비뉴 MFI % 최대. IgM 15 1185 72.2 40.4 48.9 609.5 53.3 30 1416.6 86.3 58.4 70.7 894.2 78.2 60 1324.8 80.7 73.6 89.1 945.6 82.7 120 1641.2 100 82.6 100 1143.2 100 IgG 15 12917.6 80.5 244.4 44.9 15429.8 80.8 30 14915.4 92.9 434.7 79.9 18797 98.5 60 15340.3 95.6 421.4 77.5 18694.4 97.9 120 16050.3 100 544 100 19085.8 100 이가 15 3141.9 78.2 75 66.8 9103 86.6 30 3569.1 88.8 83.9 74.8 9563.8 91 60 3539.1 88 86 76.6 9555.7 90.9 120 4020 100 112.2 100 10512.9 100 표 6: 이차 항체 배양 시간 최적화: 이차 항체의 상이한 인큐베이션 시간으로부터 생성된 평균 MFI 신호는 15분 내지 120분 범위이다. 각 신호의 값은 상대적인 신호 크기를 보여주기 위해 120분(“Max.”)에서의 신호의 백분율로도 표시됩니다.